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《二烯丙基二硫诱导人白血病HL260细胞分化差异表达cDNA文.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBulletin2004Apr;20(4):445～8·445·二烯丙基二硫诱导人白血病HL2603细胞分化差异表达cDNA文库的构建黄卫国 苏 琦 黄 琛 武明花 赵 洁 周建国 周 湘(南华大学肿瘤研究所,衡阳 421001)中国图书分类号 R282171;R28411;R329124;R329125;R酸(ATRA)相似[6]。在此基础上,我们应用抑制性消34213;R73317012;R97911[7]减杂交技术(suppressionsubtractivehybridization,文献标识码 A 文章编号
2、 100121978(2004)0420445204SSH)构建诱导人白血病细胞分化的cDNA消减文摘要 目的 应用抑制性消减杂交技术构建二烯丙基二硫库,以期克隆DADS诱导人白血病细胞分化的相关(diallyldisulfide,DADS)诱导人白血病细胞分化的消减杂交基因,阐明DADS诱导白血病分化的分子机制。cDNA文库,以期克隆DADS诱导人白血病HL260细胞分化的相关基因。方法 用DADS诱导人白血病HL260细胞分化,1 材料和方法+1.1 材料 人白血病细胞株HL260从中南大学细提取polyARNA,反转录合成cDNA,消化成短片段后分成两组,分别与两种不同
3、的接头连接,再与未处理的白血病细-1胞库引进,用含100ml·L小牛血清的RPMI1640培胞cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR扩增,将PCR养液,37℃培养于含50ml·L-1CO2的培养箱中。产物与pGEM2T线性载体连接,转化大肠杆菌进行文库扩DADS为Fluka公司产品;Trizol试剂购自上海生物增,随机挑取克隆进行酶切鉴定。结果 成功地构建了具有+工程公司;polyARNA纯化试剂盒PolyATractsys2高消减效率的DADS诱导白血病细胞分化的cDNA文库,随tem、pGEM2T质粒载体和感受态大肠杆菌JM109为机挑取消200个克隆制备质粒并酶切分
4、析,其中8415%的克Promega公司产品;PCR2SelectcDNASubtraction试剂隆均具有100～600bp左右的插入片段,说明每一克隆中均含有特异性的目的片段,从而为大批量筛选、克隆DADS诱盒、AdvantagecDNAPCRKit和限制性内切酶EcoRI导人白血病细胞分化的相关未知新基因奠定了基础。结论为Clontech公司产品;氨苄青霉素、X2gal、IPTG均为DADS能诱导人白血病HL260细胞分化,并引起相关的基BBI公司产品。PCR扩增仪为BiometraT2grandient因发生改变,而抑制性消减杂交技术能有效地分离差异表达梯度PCR仪。
5、的基因。1.2 方法+1.2.1polyARNA的分离纯化 培养HL260细胞关键词 二烯丙基二硫;白血病;分化;抑制性消减杂交-1至对数生长期,加入含1125mg·LDADS的培养基继续培养细胞72h,诱导细胞分化。分别收集约1 大蒜作为一种传统的中药已经使用了数千年,8×10未处理和处理的HL260细胞,按Trizol试剂的并在世界各地被广泛用作预防性药物。意大利和中说明书提取总RNA。按Poly2ATractsystem的说明书国的流行病学研究都表明大蒜具有抗肿瘤作[1～3]操作,先将总RNA于65℃加热10min变性,与生物用。二烯丙基二硫(DADS)为大蒜的主要有
6、效素标记的多聚T探针结合后,再与链霉蛋白抗生素成分之一,本实验室先前的研究证实DADS可抑制[4,5]常磁性颗粒结合,通过磁珠吸附方法分离纯化得到胃癌MGC2803细胞生长并诱导其向成熟分化;+polyARNA,紫外分光法和琼脂糖凝胶电泳鉴定总并且发现DADS可以在体外诱导白血病HL260细胞+-1RNA和polyARNA的质量和含量,以此作为消减向粒系分化,其作用在1125mg·L时与全反式维甲杂交的起始材料。20030910收稿,20031104修回1.2.2cDNA合成 按文献[7]方法进行,先取2μg3湖南省自然科学基金,No02JJY2026,湖南省卫生厅科研基金课
7、题,+-1的polyARNA,1μl浓度为10μmol·L的cDNA合No00068和湖南省教育厅科研基金课题,No02C394-1成引物,1μldNTP(10mmol·Leach)在禽病毒反转作者简介:黄卫国,男,28岁,硕士生。研究方向:白血病诱导分化机制研究;录酶(AMV,20U)作用下于42℃反应90min,合成苏 琦,男,57岁,教授,博士生导师。研究方向:肿瘤病cDNA第一链。立即加入DNA聚合酶1,RNaseH,因发病学与防治。通讯作者。Tel:073428281547,Fax:07342
