btg1在肾细胞癌发生发展中的作用及其机制的研究

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1、lIIIIIIlllllllllllllqllllllllllllLIIIIIIIIIIIIIY2437917隶．初大·莹临床医学硕士学位论文BTGl在肾细胞癌发生发展中的作用及其机制的研究研究生姓名：割壹龌导师姓名：陈明申清学位类别峰鏖医堂亟±学位授予单位盔壶去堂专业名称监压医皇论文答辩日期至Q!墨生Q墨旦!鱼旦研究方向泌基处拄学位授予日期至Q!墨生旦答辩委员会主席瑟垃熬攫评阅人瑟直旦夔援隶。初大·嘤硕士学位论文BTG1在肾细胞癌发生发展中的作用及其机制的研究本论文获国家自然科学基金(81070592、81202034)教育部(201200

2、92120071)江苏省科技厅BK2012336)南京市科技局(201201053)东南大学3290002402)资助Bresearcnabouttheinfluence0t■1‘1o‘一inthedevelopmentofrenalcellcanceranditsmechanismAThesisSubmittedtoSoutheastUniversityFortheAcademicDegreeofMasterofMedicineBYLIUChunhuiSupervisedbyProfessorCHENMingSchoolofMedicine

3、SoutheastUniversity眦7洲1㈣9眦7IⅢ3帆4帅Z呲Ye1，■，r】—r■r一『mG1r东南大学学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得东南大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：壹烫塑东南大学学位论文使用授权声明东南大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆有权保留本人所

4、送交学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。除在保密期内的保密论文外，允许论文被查阅和借阅，可以公布(包括刊登)论文的全部或部分内容。论文的公布(包括刊登)授权东南大学研究生院办理。研究生签名：塞!挫导师签名：中文摘要BTGl在肾细胞癌发生发展中的作用及其机制的研究东南大学医学院外科学硕士研究生刘春辉导师陈明目的研究B细胞易位基因1(B．celltranslocationgene1，BTGl)基因在肾透明细胞癌细胞株(786．O)与人正常肾小管上皮细胞株(HK．2)中表达

5、的差异。BTGl对786．O细胞及HK．2细胞增殖、凋亡、迁移的影响，并探讨BTGl与PRMTl的相互作用，初步明确BTGl对肾透明细胞癌的作用机制，为肾透明细胞癌的发病机制提供理论基础和试验依据。方法1、Westernblotting检测BTGl在786．O和HK．2中表达差异。2、构建、提取、鉴定BTGl表达质粒，构建BTGl的RNA干扰片段及对照片段。3、应用脂质体Lipofactmin2000转染BTGl抑制剂及对照干扰片段于HK．2细胞，转染BTGl表达质粒及对照质粒于786．O细胞，Westernblotting检测BTGl蛋白表

6、达。4、应用MTT法检测BTGl对786．O细胞和HK．2细胞增殖的影响；5、Transwell实验检测BTGl对HK细胞和786．O细胞迁移能力的影响。6、应用流式细胞仪检测BTGl对肾786．O细胞和HK．2细胞凋亡及细胞周期的影响。7、在激光共聚焦显微镜下，应用免疫荧光对BTGl和PRMTl在HK．2细胞和786一O细胞中进行定位。结果1、Westernblotting显示BTGl在786．O细胞中的表达低于HK．2细胞。2、构建带有全长BTGlcDNA的pci．neo真核表达载体，经基因测序、比对，证实质粒构建成功。3、与对照组相比，

7、转染BTGl表达质粒的786．O细胞中BTGl蛋白表达量增加，786．O细胞的增殖能力降低，转染BTGl抑制剂的HK一2细胞中BTGl蛋白表达量降低，HK．2细胞的增殖能力增强。4、与对照组相比，转染BTGl表达质粒的786．O细胞迁移能力降低，转染BTGl抑制剂的HK一2细胞迁移能力增强。5、与对照组相比，转染BTGl表达质粒的786．O细胞凋亡细胞增多，Go／Gl期细胞比例升高。转染BTGl抑制剂的HK．2细胞凋亡细胞减少，G0／Gl期细胞比例降低。6、免疫共定位显示在HK．2和786．O细胞中，BTGl与PRMTl之间存在空间位置的重叠

8、。T东南大学硕士学位论文结论：l、转染BTGl质粒，可以提高786．O细胞中BTGl表达水平，转染BTGl抑制剂可以降低HK．2细胞中BTGl的表达水平。2、BTG