农杆菌介导的西瓜遗传转化体系的研究

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1、AdissertationsubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterTheResearchofAgrobacterium--mediatedGeneticTransformationSystemofWatermelonByLiNaSupervisor：Prof．Wen—enZhaoChemicalEngineering一SchoolofChemicalEngineeringandEnergyApril，2014学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经

2、注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：日期：加f缈年j月；7日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学

3、位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：莲唧／日期：为◇年岁月≥7日摘要我国的西瓜年产量居世界首位，但因常规育种周期比较长，使西瓜的种质创新与新品种的提供无法满足市场需求。通过基因工程的方法来改良西瓜品质，己成为一种选育西瓜新品种的有效途径。近年随着对类胡萝卜素营养保健功能的广泛认识，越来越多的学者对西瓜瓤中类胡萝卜素组成及合成途径进行深入研究，以期通过转基因技术提高西瓜中类胡萝卜素的含量，并进行种质创新。本试验建立西瓜子叶组织培养体系和子叶遗传转化体系，正是为要开展西瓜类胡萝卜素基因工程及其代谢调控探究提供

4、技术保障。试验以西瓜子叶为外植体，研究子叶苗龄、不同激素浓度对子叶诱导分化影响以及再生条件，建立西瓜子叶离体高效组织培养体系。然后用西瓜子叶作为受体，研究预培养、农杆菌侵染和共培养时间对抗性芽分化的影响，以及不同抗生素浓度对西瓜子叶生长情况的影响，建立农杆菌介导的PSY基因遗传转化体系。通过试验，取得以下结果：(1)建立了以西瓜子叶作为外植体的组织培养体系。通过对西瓜子叶组织培养几个关键因素的试验，发现本试验条件下适宜的培养条件为：子叶苗龄的适宜时间为4d，子叶苗龄较短和较长都不利于不定芽的分化，子叶在黑暗条件培养一段时间的分化率较高，适宜培养基为MS+6-BA2．0mg／

5、L+IBA0．5mg／L+309／L蔗糖+79／L琼脂和MS+6-BA2．0mg／L+IAAO．5mg／L+309／L蔗糖+79／L琼脂。(2)建立了农杆菌介导的西瓜子叶遗传转化体系。以4d苗龄的子叶为受体，研究不同侵染时间(15，30，45，60rain)、预培养时间(2，3d)、共培养时间(2，3，4d)对抗性芽分化的影响，也研究了抗生素(Kan、Amp、Cef)对西瓜子叶生长情况的影响。试验发现75mg／L的Kan能够很好的筛选出抗性芽，两周之内，200mg／L的Amp和400mg／L的Cef能够较好的抑制农杆菌大量的繁殖。预培养时间2d为宜，菌液侵染15min，接入

6、MS+6-BA2．0mg／L+IBAO．5mg／L+Kan75mg／L+Amp200mg／L+309／L蔗糖+79／L琼脂，黑暗条件下共培养3d，然后接入MS+6-BA2．0mg／L+IBAO．5mg／L+Kan75mg／L+Amp200mg／L+309／L蔗糖+79／L琼脂的筛选培养基上，在温度为25℃士2℃，2000T摘要lx12h／d光照条件下进行培养，30天左右获得抗性芽。(3)本试验最后共获得4株抗性植株，抗性植株经PCR检测，其中l株为阳性植株，其他3株为假阳性植株，初步认为外源基因PSY已经整合到西瓜基因组中。关键词：西瓜；子叶；八氢番茄红素合成酶基因；遗传转

7、化AbstractChinaiStheleadingproducerandconsumerofwatermelonsintheworld．Butconventionalbreedingprocessislongandlaborious，SOgermplasminnovationandsupplyofnewwatermelonvarietiesCannotmeetmarketdemands．Geneticengineeringhasbecomeaneffectivetoolofbreedingnewvarieties