农杆菌介导茄子遗传转化体系研究

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1、SHANGHAIJIAOTONGUNIVERSITY硕士学位论文MASTER’STHESIS论文题目：农杆菌介导茄子遗传转化体系研究学科专业：园艺专业作者姓名：张国刚指导老师：刘杨日期:2015年1月上海交通大学硕士学位论文农杆菌介导茄子遗传转化体系研究硕士研究生：张国刚学号：1121509075导师：刘杨专业：园艺(专业学位)所在单位：农业与生物学院答辩日期：2015年1月授予学位单位：上海交通大学DissertationSubmittedtoShanghaiJiaoTongUniversityfortheDegreeof

2、MasterRESEARCHONEFFICIENTTRANSFORMATIONSYSTEMOFEGGPLANTMEDIATEDBYAGROBACTERIUMAuthor:ZHANGGuogangStudentID:1121509075Supervisor:ViceProf.LIUYangSpecialty:HorticultureDepartment:CollegeofAgricultureandBiologyDateofDefence：Jan.2015Drgree-Conferring-Institution:Shangh

3、aiJiaoTongUniversity上海交通大学硕士学位论文农杆菌介导茄子遗传转化体系研究摘要茄子(solanummelongnaL.)，茄科茄属一年生草本植物，是我国一种重要经济类蔬菜。茄子产量和品质容易受到虫害、病害、不良环境等影响。因此，培育具有抗虫、抗病、抗逆的茄子新品种具有重要意义。常规的育种方式是品种改良的重要手段，同时也存在选育年限长、远源杂交不亲和及种质资源匮乏等问题。利用转基因技术培育茄子新品种是未来主要的研究方向。本研究以茄子子叶为外植体材料，探讨植物激素NAA、ZT、6-BA的不同浓度与组合对白撮茄

4、子叶外植体分化的影响、比较不同基因型外植体分化能力、研究硝酸银在外植体出芽分化中的作用。结果发现，白撮茄愈伤组织分化最佳培养基为MS+NAA0.1mg/L+ZT3.0mg/L，出愈率为97%；诱导芽分化最佳培养基为MS+NAA0.1mg/L+ZT4.0mg/L+6-BA1.5mg/L+AgNO38.0mg/L，出芽率为82%；不同基因型外植体分化能力不同；AgNO3对外植体芽分化具有促进作用；1/2MS培养基生根效果较好，生根率可达80%。建立了稳定的茄子再生体系。本研究还对农杆菌介导的茄子遗传转化进行了初步探索，筛选抑制非

5、转化外植体的潮霉素浓度、抑制农杆菌生长的特美汀浓度，研究不同预培养时间、菌液浓度、侵染时间对外植体转化率的影响。结果表明：10mg/L的潮霉素可对外植体抗性芽进行有效筛选；150mg/L特美汀可以有效抑制农杆菌污染；预培养2天的外植体分化效果好，转化率为71%；菌液浓度OD600值为0.5时适宜侵染，转化率为80%；I上海交通大学硕士学位论文菌液侵染时间为10min时，转化率为76%。GUS染色结果和分子检测初步证明，外源基因已经整合到‘白撮茄’基因组中，获得了8株转化植株。关键词：茄子，子叶，再生体系，农杆菌介导的遗传转化

6、，分子检测II上海交通大学硕士学位论文ResearchonEfficientTransformationSystemofEggplantMediatedbyAgrobacterium.ABSTRACTEggplant(solanummelongnaL.),annualherbplants,animportanteconomicvegetablesinChina.However,theyieldandqualityofeggplantisvulnerabletodiseases,insectsorotheradverseenv

7、ironment.Therefore,breedingneweggplantvarietiesresistancetoinsects,diseaseshasgreatsignificance.Regularbreedingmethodsandpracticeofeggplantplayanimportantroleinimprovingthenewspecies,atthesametimetherearesomeproblems,likelongbreedingperiod,farsourcehybridincompatib

8、ilityandlackofgermplasmresources.Itisvitalforustoutilizetransgenictechnologytocultivateneweggplant.Usingeggplantcotyledonsasexplants,differentcon