99tcm-vegf125-136-mag3多肽片段的制备及其在骨肉瘤荷瘤裸鼠体内分布与显像研究

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1、河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指T91J,组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名为单位河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应法律责任。～研一舷翩签章髭小一一鼍媾搿涕j，，』＼·；‘·j?。_’。}河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写

2、的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签翩签章：靓确训净湖7日目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4研究论文99Tcm-VEGFl25-136．MAG3多肽片段的制备及其在骨肉瘤荷瘤鼠体内分布与显像研究前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7日lJ舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．11附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．13附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．16讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．18结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．22参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．22综述肿瘤血管生成的分子影像学研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯25致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．34个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯35中文摘要∞Tc'-VEGF，刖圹MG3多肽片段的制备及其在骨肉瘤荷瘤裸鼠体内分布与显像研究摘要目的：制备99Tcm标记的血管内皮生长因子(vascular

4、endothelialgrowthfactor，VEGFl25-136)多肽片段探针，并进行其在人骨肉瘤MG63荷瘤裸鼠的体内分布及肿瘤受体显像的实验，评估99Tcm．VEGFl25-136的体外稳定性，体内代谢过程及显像特征，以寻找一种肿瘤特异性分子探针，能够反映肿瘤组织血管生成活性，为肿瘤的早期诊断及靶向治疗提供实验依据。方法：lVEGFl25．136．MAG3的合成与标记采用自动多肽合成仪常规固相法合成目标多肽QKRKRKKSRYKS，并在合成过程中直接完成与巯基乙酰基三甘氨酸(MAG3)的偶联，形成VEGFl25．136．MAG3，然后进行99Tcm标记，寻找最佳标记条件

5、。利用高效液相色谱法(HighPerformanceLiquidChromatography，HPLC)及纸层析法测定标记物的即刻标记率，对标记物进行鉴定。同时将标记物于室温中放置1h、2h、6h、12h，采用纸层析法测定其标记率，检测该标记物的体外稳定性。2人骨肉瘤MG63荷瘤裸鼠动物模型的建立复苏人骨肉瘤MG63细胞株，采用贴壁法，DMEM高糖培养基(含10％的灭活胎牛血清)培养，收获对数生长期的细胞，制备成约5×107个／ml细胞浓度的单细胞悬液，按0．2ml／只接种到3~4周龄的雌性裸鼠的左侧前肢根部背侧。裸鼠在无特殊病原体级(specifcpathogenfree，SP

6、F)环境中饲养，待肿瘤长至0．8cm-1．0cm时，选取肿瘤形态较规则，中心无坏死的骨肉瘤荷瘤裸鼠模型纳入实验。取少量瘤体组织，10％甲醛固定，进行病理学鉴定。399Tcm-VEGFl25．136．MAG3在人骨肉瘤MG63荷瘤裸鼠体内分布研究取20只骨肉瘤荷瘤裸鼠，随机分为4组：O．5h组、1h组、2h组、4h组，每组5只，分别经尾静脉注射18．5MBqI的99Tcm—VEGFl25．136-MAG3，并于注射后0．5h、lh、2h、4h按组心脏取血后将荷瘤裸鼠处死。取心脏、肝脏、中文摘要脾脏、肺脏、肾脏、胃、肠道、肌肉、骨、脑等主要脏器及肿瘤组织，用生理盐水冲洗干净后滤纸吸干

7、水分，电子天平准确测量主要脏器及肿瘤组织的质量并用单道Y井型计数器测量其放射性计数，取相同注射剂量的99Tcm-VEGFl25-136,MAG3作99Tcm的衰变校正，计算所取标本的每克组织中放射性计数占标准源总计数的比值(％ID／g)；计算肿瘤组织与对侧肌肉组织(正常组织)的％ID／g的比值(tumortomuscleratios，T／M)。499Tcm．Ⅵ三GFl25-136．MAG3在人骨肉瘤MG63荷瘤裸鼠内肿瘤显像研究取5只骨肉瘤荷瘤裸鼠作为实验组，经尾静脉注射18．5