dlc2表达调控结直肠癌发生、侵袭转移及预后的作用机制研究

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1、中图分类号UDCR656．9610博士学位论文学校代码!Q5三3DLC2表达调控结直肠癌发生、侵袭转移及预后的作用机制研究StudyofRegulationMechanismofDevelopment，InvasionandMetastasisviaDLC2ExpressioninColorectalCarcinoma作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：高凯临床医学外科学湘雅三医院李小荣教授答辩委员会主席中南大学2013年4月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加

2、以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均己在论文中作了明确的说明。作者签名遗刈日期：五＆年』月立日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众

3、提供信息服务。储签名剑新签名鸷西嗍监年』月盈日摘要结直肠癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，由于其发病率、转移率、复发率以及死亡率均较高，使其成为一种严重威胁人类生命健康的恶性肿瘤。随着影像学、外科学的进步以及术后化疗的应用，结直肠癌的预后已经有所改善，但肿瘤的复发、转移仍是术后患者死亡的主要原因，且已成为提高患者生存期及改善预后的瓶颈。因此，深入研究结直肠癌发生、侵袭、转移的分子机制并努力探索有效的对抗复发、转移的治疗手段，对于进一步提高患者的生存期及改善预后有重要意义。RhoGTP酶激活蛋白家族(GTPase．activatingProteins，GAPs

4、)调控RhoGTP酶的活性。RhoGAPs的重要功能是作为信号传导的分子开关，将活化的Rho．GTP结合蛋白转变为失活的GDP结合状态，从而负性调节RhoGTP酶活性，由此参与粘附斑的形成和细胞骨架的重塑。DLC蛋白亚家族属于RhoGAPs家族，由三个氨基酸序列高度同源的成员构成：DLCl、DLC2和DLC3。它们也都属于多结构域蛋白，含有SAM(sterilealphamotif)、RhoGAP(RhoGTPase---activatingprotein)和START(StAR-relatedlipid--transfer)---个结构域。DLC2(De

5、letedinlivercancer2)又被叫作STARD13，于2003年被成功克隆的一种抑癌基因，位于染色体13q12．3。目前对于DLC2的研究尚处起步阶段，至今还没有对DLC2在结直肠癌中的表达情况进行相关研究的报道；其次，作为一个与DLCl结构上高度同源的蛋白，DLC2是否在结直肠癌的发生、侵袭转移中也发挥重要作用，这仍是需要进一步研究的问题。Rho家族蛋白是小G蛋白Ras超家族成员，它们是一组分子量为20KD--一30KD的鸟苷酸结合蛋白，具有GTP酶活性。1985年，Rho作为Ras同源物首先被克隆出来，称Ras榷[关单体GTP酶，Rho具有

6、RhoA、RhoB和RhoC三种异构体，Rho家族蛋白参与调节了细胞的多种生命过程，包括肌动蛋白的细胞骨架重组、细胞黏附、细胞运动、细胞周期进展、细胞分裂以及基因转录等。近年来研究发现，Rho家族蛋白与肿瘤发生、发展的多个方面均有联系，包括肿瘤的增殖、侵袭和转移、细胞凋亡、肿瘤新生血管的形成等。Rho家族，特别是RhoA在多种肿瘤组织中表达增加并和肿瘤恶性程度密切相关，提示其在肿瘤发生和发展中具有重要作用。目前，RhoA与恶性肿瘤侵袭与转移的关系已成为研究的热点之II由于DLC2蛋白的RhoGAP结构域能够激活Rho蛋白的GTP酶水解活性，使Rho蛋白由有

7、活性的GTP结合态转化为无活性的GDP结合态，因此扮演了Rho蛋白家族负性调控因子的角色。同时近来研究已经证实DLC2可以通过抑$1]RhoA激酶的活性，调节基质金属蛋白酶(matrixmetalprotease，MMP)的产生，从而改变细胞形态，影响细胞迁移。这提示DLC2可能通过调控RhoA表达从而参与结直肠癌的发生、侵袭、转移过程，但其具体作用机制尚不清楚。本课题首先检测结直肠癌组织及癌旁组织标本中DLC2mRNA及蛋白的表达情况，比较结直肠癌及癌旁组织之间表达差异，并且在临床病理变量中比较DLC2表达差异。然后，通过RNA干扰技术，抑制结直肠癌细胞

8、系HT-29细胞中DLC2的表达水平，并综合利用一系列分子生物学和