盐酸血竭素对耐药性金黄色葡萄球菌α-溶血素和分选酶作用研究

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1、分类号：S859.7单位代码：10193密级：公开学号：20130835博士学位论文盐酸血竭素对耐药性金黄色葡萄球菌α-溶血素和分选酶作用研究TheEffectofDracorhodinperochlorate’sAttenuationagainstMethicilin-resistantStaphylococcusaureusα-toxinandSortase学位授予单位及代码：吉林农业大学（10193）学科专业名称及代码：预防兽医学（090602）作者姓名：刘玉敏指导教师：王全凯__研究方向：经济动物疫病防治学位类别：农学博士_2017年12月盐酸血竭素对耐药性

2、金黄色葡萄球菌α-溶血素和分选酶作用研究TheEffectofDracorhodinperochlorate’sAttenuationagainstMethicilin-resistantStaphylococcusaureusα-toxinandSortase作者姓名：刘玉敏________指导教师：王全凯__________论文答辩日期：2017.12.01_______授予学位日期：2017.12_______答辩委员会主席：丁壮__________论文评阅人：李继昌__________李英伦__________孙淑红__________2017年12月独创性

3、声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在导师指导下，独立进行研究所取得的成果。尽我所知，除文中特别加以标注和致谢所列内容外，论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得吉林农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。本学位论文所有内容若有不实之处，本人愿意承担一切相关法律责任和后果。学位论文作者签名：签字日期：年月日关于学位论文使用授权的声明1、本人完全了解吉林农业大学有关保留和使用学位论文的规定，即：研究生在校攻读学位期间所完成的论文及相关成果的知识产权

4、属吉林农业大学所有，并同意将本论文的版权授权给吉林农业大学，学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。2、本人（同意/不同意，务必打印后填写）吉林农业大学将本论文版权授权给不同媒体进行电子出版、多媒体出版、网络出版以及其他形式出版（涉密学位论文解密后应遵守此协议）。3、本人声明毕业后若发表在攻读研究生学位期间完成的论文及相关的学术成果，必须以吉林农业大学作为第一署名单位。学位论文作者签名：签字日期：年月日指导教师签名：签字日期：年月日摘要金黄色葡萄球菌是一种广泛存在于自然界中的机会致病菌，研究表明

5、约有20%的人体内存在有金黄色葡萄球菌定植，严重危害公共卫生。作为一种革兰氏阳性病原菌，金黄色葡萄球菌感染主要可以表现为轻度的皮肤-软组织感染以及严重性的致死性疾病，如坏死性的肺炎、菌血症及败血症。然而，由于金黄色葡萄球菌有着很强的获得耐药性的能力，临床上分离出大量的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA），在流行的MRSA菌株中，研究最广且广泛存在的菌株就是USA300。至今临床上主要使用万古霉素、利奈唑胺及达托霉素等抗生素疗法治疗MRSA感染，但是随着抗生素的使用，临床很快出现了这几种抗生素的耐药菌，这使得MRSA感染的治疗更加困难。与此同时，抗生素疗法失败的案例在

6、临床中不断被报道。不可避免的耐药性问题的产生和相对滞后的新抗生素研发速度，使得临床迫切需要新的方法来对抗金黄色葡萄球菌感染。金黄色葡萄球菌分泌的多种毒力因子在病原菌的黏附、侵袭、逃避免疫及引起细胞损伤方面发挥着重要的作用，如分选酶、黏附素、α-溶血素及PVL等。在这些毒力因子中，分选酶介导细菌表面蛋白的锚定，对细菌粘附定植发挥了重要的作用。α-溶血素是一种具有多种功能的水溶性毒素，在皮肤及软组织感染、坏死性的肺炎及致死性的败血症中发挥了重要的作用。研究表明，分选酶或α-溶血素敲除株在金黄色葡萄球菌引起的小鼠肺炎、皮肤坏死、败血症、腹膜炎、角膜感染、中枢神经系统感染、

7、心内膜感染、肾炎及乳腺感染中的致病性下降。因此分选酶和α-溶血素是抗金葡菌尤其是耐药性金葡菌感染的潜在药物靶标。盐酸血竭素（Dracorhodinperochlorate；DP）是从一种叫血竭的水果中分离出的物质。研究表明，盐酸血竭素可以有效的引起Hela细胞及人乳腺癌细胞MCF-7的凋亡。在此，我们通过溶血试验发现盐酸血竭素与金黄色葡萄球菌USA300共培养后可显著抑制菌液上清介导的溶血活性，蛋白免疫印迹分析表明，这一抑制作用是由于盐酸血竭素处理可明显降低金黄色葡萄球菌USA300α-溶血素的表达。而荧光定量RT-PCR实验结果进一步发现16µg/ml盐酸血竭