奥曲肽-紫杉醇偶联物靶向逆转人卵巢癌细胞紫杉醇耐药性的体外实验研究

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1、隶I初大·坚硕士学位论文万方数据奥曲肽．紫杉醇偶联物靶向逆转人卵巢癌细胞紫杉醇耐药性的体外实验研究注：本研究为江苏省卫生厅青年基金项目(Q201305)，南京市科技基金项目(201201054)，东南大学重大科学研究引导基金项目(KJ20100493)资助。万方数据STUDIESOFOCTREOTIDE．PACLITAXELCONJUGATEREVERSETHEPACLITAXELRESISTANCEINHUMANoVARIANCANCERCELLSINVITROAThesisSubmittedtoSou

2、theastUniversityFortheAcademicDegreeofMasterofMedicineBYZHANGXiaoyuSupervisedbyProfessorSHENYangCollegeofClinicalMedicineSoutheastUniversityMay2014万方数据东南大学学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得

3、东南大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：彳蛆日期：汪丛生』心东南大学学位论文使用授权声明东南大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。除在保密期内的保密论文外，允许论文被查阅和借阅，可以公布(包括以电子信息形式刊登)论文的全部内容或中、英文摘要等部分内容。论文的公布(包括以电子信

4、息形式刊登)授权东南大学研究生院办理。研究生签名：越导师签名：睁日期：一；J万方数据中文捅要奥曲肽．紫杉醇偶联物靶向逆转人卵巢癌细胞紫杉醇耐药性的体外实验研究硕士研究生：张啸宇导师：沈杨副教授东南大学中文摘要第一部分奥曲肽．紫杉醇偶联物的合成目的：合成纯化的奥曲肽．紫杉醇偶联物。方法：与江苏省药物研究所进行药物合作合成，采用二苯基N．琥珀酰亚胺磷酸酯(SDPP)作为催化剂，先合成N一羟基丁二酰亚胺紫杉醇丁二酸酯，再与游离奥曲肽偶联得到奥曲肽．紫杉醇偶联物。结果：成功合成得到纯化的奥曲肽．紫杉醇偶联物，收率

5、60％，纯度为98％，其结构经MS确证，ESI·MS(毗)：1954[M+H】+。结论：采用SPDD作为催化剂，能有效合成紫杉醇丁二酸NHS偶联物，并可以用于与奥曲肽偶联，这可作为奥曲肽一紫杉醇偶联物合成的新方法。第二部分奥曲肽．紫杉醇偶联物抑带i]A2780／Taxol细胞生长的体外实验研究目的：体外环境下研究奥曲肽．紫杉醇偶联物对人耐紫杉醇卵巢癌细胞A2780／Taxol的生长抑制作用，及对细胞凋亡的影响。方法：11外购A2780／Taxol细胞并传代培养，采用细胞免疫化学法鉴定细胞表面生长抑素受体2

6、亚型(somatostatinreceptor2，SSTR2)的表达；2)奥曲肽一紫杉醇偶联物以0、2．5、5．0、10．0、20．0、40．Oug／n[1l6种浓度分别加入A2780／Taxol细胞培养液中，用CCK，8法分析各种浓度药物作用24、48、72dx时对卵巢癌细胞增殖的影响；3)应用流式细胞仪检测偶联物(10．0ug／m1)对A2780FFaxol细胞凋亡的影响。结果：1、)细胞免疫化学法结果显示A2780／Taxol细胞表面表达SSTR2；2)奥曲肽．紫杉醇偶联物对A2780／Taxol细

7、胞增殖的影响：偶联物在2．5删浓度时即对A2780／Taxol细胞有增殖抑制作用，抑制作用随浓度的增加呈增强趋势，在浓度>lO“g／ml时，作用时万方数据銮里奎兰堡主堂堡堡苎间在0-72h内，出现明显的时间依赖性(P．／o．05)；3)流式细胞仪检测细胞凋亡：结果显示偶联物具有诱导细胞凋亡的作用，不同浓度组与对照组相比差异均有统计学意义，偶联物诱导细胞凋亡的作用明显高于紫杉醇及奥曲肽单独作用，差异有统计学意义(P<0．05)。结论：1)体外环境下，奥曲肽具有促进A2780／Taxol细胞凋亡的作用。2)奥

8、曲肽一紫杉醇偶联物可抑制A2780／Taxol细胞的增殖，作用呈时间剂量依赖性。第三部分奥曲肽．紫杉醇偶联物对A2780／T奴ol细胞株耐药基因和蛋白表达的影响目的-在第二部分实验结果的基础上，进一步研究奥曲肽紫杉醇偶联物在体外环境下对A2780／Taxol细胞SSTR2、MDRl、VEGFmRNA表达的影响，探讨偶联物体外增加紫杉醇敏感性，逆转A2780／Taxol细胞耐药性的可能机制。方法：1)根据CCK-8结果选取中低毒