戊乙奎醚对内毒素致新生大鼠急性肺损伤时hif-1α表达的影响

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1、AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterEffectofpenehyclidinehydrochlorideonHIF·1IDEexpressioninLPS·inducedacutelunginjuryinratsByBoliuSupervisor：Prof．LihuaJiangAnesthesiologyThethirdaffiliatedhospitalofZhengzhouUniversityMay2013学位论文原创性声明燃

2、本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：剀鸽日期：如眵年占月f日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑9、I'1大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅

3、；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：却鹘日期：Z003年莎月IEt摘要戊乙奎醚对内毒素致新生大鼠急性肺损伤时HIF．1a表达的’影响研究生刘博导师姜丽华郑州大学第三临床学院急性肺损伤(acutelunginjury，ALI)是由于败血症、肺炎、吸入胃肠道内容物，外伤和其他一些

4、临床疾病引起的肺实质病变，导致的急性低氧性呼吸功能不全，可起病于任何年龄的患者。病情严重的急性肺损伤可进一步发展，成为急性呼吸窘迫综合症(ARDS)，甚至演变成为多器官功能障碍综合征(MODS)，急性肺损伤的病死率高达44％以上。新生儿由于肺组织发育不成熟，对外界损伤刺激抵御能力差。新生儿期由于重症感染、损伤，临床表现为进行性呼吸困难、肺部湿哕音、咳出粉红色泡沫痰，新生儿由于肺血管基膜结构较薄，易引发肺出血，后果更加严重。所以对新生儿急性肺损伤预防的研究具有重要的临床意义。目前，有国外学者发现，缺氧诱导因子

5、．10c(HIF．1a)在急性肺损伤的发病过程中起到了重要的作用。本研究拟通过内毒素(LPS)腹腔注射给药的方法，制作新生大鼠急性肺损伤的动物模型，并通过盐酸戊乙奎醚(penehyclidinehydrochloride，PHC)在内毒素腹腔注射给药前进行干预处理，观察其对相关介质的影响作用，并通过对肺组织病理学的观察，探讨盐酸戊乙奎醚在急性肺损伤新生大鼠中的保护作用机制，以及该保护作用与缺氧诱导因子．1仅表达的关系。为新生儿AU的临床防治提供新的理论依据。目的探讨盐酸戊乙奎醚对内毒素(LPS)致急性肺损伤

6、(ALl)新生大鼠的保护作用以及该保护作用与缺氧诱导因子．10【(HIF．1a)表达的关系。为新生儿急性肺损伤的临床防治提供新的理论依据。摘要材料与方法1．研究对象24只健康7日龄新生SD大鼠，体重17～229，雌雄不拘，购买于郑州大学医学院河南省实验动物中心。2．实验方法2．1动物模型的制作采取腹腔注射脂多糖(1ipopolysaccharide，LPS)的造模方法，制作新生大鼠内毒素致急性肺损伤的动物模型。把LPS稀释，以3mg／kg的剂量，以lml注射器下腹部腹腔注射。注射后将大鼠放回笼内，在LPS注

7、射后6小时，将各组动物用350mg／kg水合氯醛腹腔注射麻醉后，开胸采取肺组织标本。依据光镜下肺组织病理学的改变以及炎症指标，可对新生大鼠ALI动物模型的成功建立进行确定。2．2动物分组将24只健康7日龄SD大鼠，采用随机数字表法分为三组(，z=8)：①空白对照绀(c组)，腹腔注射生理盐水0．3ml②肺损伤组(ALI组)，依LPS3mg／kg的剂量稀释至0．3ml腹腔注射③盐酸戊乙奎醚组(P组)，在注射3mg／kgLPS0．3ml前半个小时，腹腔注射盐酸戊乙奎醚2mg／kg。2．3肺组织的标本采集将左肺组织

8、电子称重记录湿重后置于70。C烘箱72小时烘干，用于测量湿／干重比值。将右肺上叶用DEPC水冲洗干净后，放置冻存管封存，放置至．80冰箱保存，待用于RT．PCR检测。将右肺后叶置入4％甲醛溶液内浸泡24小时，进行固定。将固定好的肺组织进行石蜡包埋、切片，并用不同浓度酒精进行梯度脱水，待用做HE染色光镜观察。将右肺下叶取出，制成匀浆液，通过在4。C电子离心机中经过15分钟1800r／min转速离心后，取其上清液，置