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《菜豆几丁质酶基因bchi的克隆及其在转基因烟草中的表达》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、分子植物育种，2008年，第6卷，第1期，第53-58页MolecularPlantBreeding,2008,Vol.6,No.1,53-58研究报告ResearchReport菜豆几丁质酶基因Bchi的克隆及其在转基因烟草中的表达王全伟1曲敏2张海玲1徐香玲1*1哈尔滨师范大学生命与环境科学学院,哈尔滨,150080;2哈尔滨商业大学食品工程学院,哈尔滨,150076*通讯作者,XXL8761@126.com摘要本文根据GenBank中公布的菜豆几丁质酶基因cDNA序列设计引物，通过RT-PCR得到一个菜豆几丁质酶基因
2、家族基因Bchi。该基因编码一个327个氨基酸的多肽，其结构包括信号肽、几丁质结合区、铰链区、催化区和液泡定位多肽，属于ClassIa类内切几丁质酶。构建该基因的植物表达载体pMHL7133-Bchi，并通过发根农杆菌R1000介导转化烟草，经PCR和Southernblot鉴定获得了4株转基因烟草株系。几丁质酶活性分析表明，转基因烟草几丁质酶活力明显高于对照。抗真菌实验结果显示，转基因烟草的叶片基本无病斑产生，表明Bchi基因在烟草中高水平的表达显著提高了烟草对真菌病害的抗性。关键词菜豆,几丁质酶,克隆和表达,烟草Clo
3、ningofBeanChitinaseGeneBchianditsExpressioninTransgenicTobaccoWangQuanwei1QuMin2ZhangHailing1XuXiangling1*1LifeScienceandEnvironmentInstitute,HarbinNormalUniversity,Harbin,150080;2FoodEngineeringCollege,HarbinUniversityofCommerce,Harbin,150076*Correspondingauthor,
4、XXL8761@126.comAbstractInthispaperweobtainedaBchigenefromthelocalbean(PhaseolusvulgarisL.)basedontheprimersdesignedbythecDNAofbeanchitinasegenepublishedinGenBankbyRT-PCRapproach.ThecDNAwouldbe-longtoClassIaendochitinase,amemberofbeanchitinasegene,encodingapolypept
5、ideof327aminoacidresiduesincludingsignalpeptide,chitin-bindingdomain,hingedomain,catalyticregionandapolypeptidelocatedinvacuole.Weconstructedtheplantexpressconstruct,pMHL7133-Bchi,andtransformeditintotobaccomediat-edbyAgrobacteriumrhizogenesR1000.Fourtransgenictob
6、accoplantswereconfirmedbyPCRandSouthernblot.Theresultsshowedthatchitinaseactivityoftransgenictobaccowasdistinctlyhigherthanthatofthecontrol.Theanti-fungiassayshowedthattherewasalmostnodiseasespotonthetransgenictobaccowhichimplythatBchigeneshouldhighexpressintobacc
7、oandmightsignificantlyenhancetheresistanceoffungidisease.KeywordsBean(PhaseolusvulgarisL.),Chitinase,Cloningandexpression,Tobacco几丁质是构成多数真菌细胞壁的主要成分之1999)、抗细菌(ZhaoandChye,1999;Xuetal.,1996)、一，同时也大量存在于昆虫和动物的甲壳中，植物中抗虫害(王海波等,1994)、抗冻(Stressmannetal.,至今尚未发现几丁质的存在，但几丁质酶
8、却广泛存2004)、植物发育(Robinsonetal.,1997;Kraghetal.,在于植物中。几丁质酶是植物在受到外界胁迫条件1996)、共生固氮(Minicetal.,1998)等方面都发挥着下产生的一种防御蛋白，是降解几丁质的糖苷酶，可重要的作用，并与人类疾病发生相关(LingandReck
