洛克沙胂促血管生成作用及vegf的表达研究

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1、洛克沙胂促血管生成作用及VEGF的表达研究StudyontheAngiogenesisofRoxasoneandtheexpressionofVEGFinduced研究生：崔卫波专业：基础兽医学导师：张雨梅教授扬州大学兽医学院2013年4月崔卫波：洛克沙胂促血管生成作用及VEGF的表达研究中文摘要洛克沙胂是国内外广泛使用的一种有机胂饲料添加剂，近来的研究表明其能促进入血管内皮细胞生长，存在着促血管生成作用及潜在的致癌风险。血管内皮生长因子(VEGF)是目前已知的最重要的血管生长调节因子。目前国内外有关洛克沙胂促血管生成作用及其VEGF的调控研究还基本是空

2、白。本研究拟通过基质胶塞血管生长模型、对内皮细胞的生长影响来研究洛克沙胂体内外促血管生长作用及对VEGF表达的影响，为探讨洛克沙胂可能的特殊毒性及潜在的致癌风险研究积累基本资料，也为洛克沙胂作为饲料添加剂在畜禽生产中使用安全性的研究有积极意义。基质胶塞模型实验中，剂量设置分别为洛克沙胂0．10gM、1．00州、10．00gM，10ng／mL采用VEGF为阳性对照，PBS为阴性对照。内皮细胞经过不同的处理后注射于ICR小鼠的皮下，lO天后检测形成胶塞的体积、重量及血红蛋白的含量。结果表明，洛克沙胂处理各组胶塞体积、重量及血红蛋白含量均明显大于PBS对照组(

3、尸

4、养上清中VEGF的量；WerstemBlot检测细胞中VEGF的表达。管形成试验评价洛克沙胂形成血管的能力。MTT的结果表明，0．10～10．009M洛克沙胂处理及VEGF组细胞活力显著高于PBS对照俨<0．05)，1．00州组OD值最高；1．00gM+Anti．KDR组显著低于1．00gM组p<0．05)；1．00gM+Anti．FLT组与1．00gM组无显著差异俨>0．05)；Anti．KDR和Anti—VEGF组显著低于PBS对照俨<0．05)，而Anti·FLT与PBS无显著差异P>O．05)。结果表明洛克沙胂具有明显的促内皮细胞生长的作用，且1

5、．00州促生长能力最强；洛克沙胂促内皮细胞生长明显与VEGF、KDR有关。扬州大学硕士学位论文2内皮细胞管形成试验中，0．0l肛M、0．10gM、1．00l-tM、10．00“M洛克沙胂处理组形成的管数显著高于PBS对照组；0．0l～1．0IxM范围内，随剂量增加形成的管数增加，1．00gM组最高，10．00oM组反而减少。内皮细胞不同处理后培养上清中VEGF含量测定表明，0．10tiM、1．00gM、10．00txM洛克沙胂组显著高于PBS对照组(P<0．05)，且1．0gM组最高；1．00ixM+Anti-KDR组显著高于1．00lxM生H俨<0．0

6、5)；1．00I_tM+Anti．FLT组与1．00lxM组无显著差异俨>0．05)；而Anti—KDR和Anti．FLT分别低于1．00lxM+Anti．KDR和1．00}tM+Anti．FLT组。表明洛克沙胂可刺激内皮细胞分泌VEGF，阻断受体FLT对细胞上清中VEGF的浓度无明显影响，而KDR阻断后使培养液中VEGF的浓度明显上升。WesternBlot检测表明0．10“M、1．00pM、10．00肛M洛克沙胂组的VEGF表达均显著高于PBS对照，且1．00雎M组表达最强。综上所述，洛克沙胂在0．1～10．00州范围内有明显的促血管生长作用，1．0

7、0州剂量时作用最强，且VEGF和KDR在洛克沙胂促血管生成中具有调节作用。关键词：洛克沙胂；内皮细胞：VEGF；基质胶塞试验；管形成试验；WesternBlot崔卫波：洛克沙胂促血管生成作用及VEGF的表达研究3ABSTRACTRoxarone，oneoftheorganicarsinefeedadditives，wasrecentlyshownthatitcanpromotethegrowthofhumanvascularendothelialcells，imagingtheangiogenesispromotionandpotentialriskof

8、cancer．Vascularendothelialgrowthfactor(V