洛克沙胂促内皮细胞生长中erkmapk信号通路的研究

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1、一’‘'一.-3-水':.立不成冷.V‘巧-?■.一;/-,;;巧;各冷:巧巧三、\爭.;户护:":一谭这、4式巧稽異梦奸诗避-V'-4''——'::、、分类号Hr学号M;S、.12048rU、-DC__密级Z-令^?^媛叫义葦養-,liYANGZHOUUNIVERSITY冷/'.^m兔辣魏:去学化冷文-读>,/子硕當/咖人方:1^洛克沙肿巧内皮细胞生长中ERK/MAPK信号<通路的研究Tlv\|-山巧-:郑玲敏余备A六發法4式萬巧?.’>‘-*卢/^、1.、'.A

2、_?^式"f三,*■):张雨梅教j爱指导教!币姓名,扬州大学,江苏扬州,225009>;'"S壬学科专业名称、气、:硕申请学位级别:基础兽医'论文提交日期:2015年4月论文答辩日期:2015年6月/’’’y.i学位授予单位:扬州欠學学位授予2015年6月T日期:嫂八答辩委员会主席;高玉时研究员'—繁難禾《編擊'-*人1?;足取焉媒虞挺含.成.本'^<.:病方;.、公;产耗苗\处心一之:洛克沙肿促内皮细胞生长中ERK/MAPK信号通路的硏究InvolvementofERK/MAPKPathwayi

3、nGrowthPromotionofRoxarsoneonEndothelialCells硏究生;郑玲敏专业;基础兽医学导リ巾;张雨梅教授扬州大学兽医学院2015年6月郑玲敏:洛克沙肿促内皮细胞生长中邸K/MAPK信号通路研究I中文摘要a一洛克沙肿(Roxrsone,Rox),是种有机神添加剂,具有促生长,抗球虫,提窩饲料转化率等优点,在世界范围内被广泛用于畜禽生产。目前研究发现低浓度的洛克沙肿对血管内皮细胞具有促进作用,但其作用机制不清楚,研巧报道极少。VEGF是血管内皮细胞生长及血管生成最重要的调节因子,ERK

4、/MAPK是调节细胞增殖、分裂的重要信号通一路之。本文在洛克沙肿对大鼠内皮细胞的生长作用中,通过特异性抑制剂脏断VEGF受(VE畑R)ERK/MAPKRas和MEK,研究ERK/MAPK信号通路在洛克体,信号通路中沙胖促内皮细胞生长中的作用。在大鼠内皮细胞体外培养中,洛克沙肿分为0.1Rox、1.0MRox和10RoxHh个组.0Rox.0,PBS作为阴性对照。1与不同的抑制剂共处理组分为1mM---a--++anMEKRox+ntiVEGFR"+antiV)、1.0jMRox+antiRasantiR_、1.0xMRoxtij"

5、)f--+n-M-+--ati)、1.0aMRox+antiVEGFR+antiRasantiV+antiR、1.0jMRox+anti"[")|an--+---MVEGFR+tiRas+antiMEK"antiV+antiR+anti);^及相应的抑制剂对照组:15-----ant-VEGFRan、1ant-asani、aniMEKaiM、aniitiV0MiRtR10tnttVEGFR()p()()-----+an-nt-i-ans+ini-。tiRas(aiV+antiR)、antVEGFR+tiRaantMEK(atV+anti

6、R+antiM)运用MTT方法检测内皮细胞活力sem-,Elba方法检测培养上清中VEGF的水平,Wetblot和定-PCRERK/MAPK白的表达及其mRNA水平量RT技术检测信号通路中相关蛋。MTT法检测内皮细胞处理24h的细胞活为显示:Rox0.1组、1.0组、10<组OD值显著高于阴性对照组(户0.01,1.0曲IRox组作用最强。VEGFR、民as、MEK)抑制剂与1.0HMRox共处理组的细胞活力极显著低于1.0tiMRox洛克沙巧单独处理组<户0.01),高于信号分子单独阻断组。两种或til上抑制剂联合化断组的细胞活为低于单独

7、(阻断组。洛克沙肿促进内皮细胞的增殖,但特异性阻断VEGFR、Ras和MEK影响洛克沙肿对内皮细胞的増殖作用。sa内皮细胞不同处理后,Hi方法检测培养上清中VEGF的含量表明:0.1、1.0和10Rox组VEGF含量显著高于PBS组戶<0.01,1.0Rox组VEGF含量最高。不同信号()<分子抑制剂组VEGF表达水平极显著低于正常组(P0.01)。1.0^lMRox联合或单独抑制VEGFR、Ras、MEK信号分子,VEGF的表达水平显著低于l

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