chlex-100法快速提取甜瓜白粉病菌基因组dna

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1、北方园艺2010(10)：167～169·生物技术·Chlex-100法快速提取甜瓜白粉病菌基因组DNA刘建利，赵海霞(北方民族大学生物科学与工程学院，宁夏银川750021)摘要：现以白粉病菌分生孢子为材料，用Chlex-100法快速提取白粉病菌基因组DNA，并以此为模板PCR扩增出5．8ITSrDNA区段，以建立快速提取甜瓜白粉病菌基因组DNA的方法。结果表明：Chlex-100法是快速提取白粉病菌基因组DNA的高效方法。关键词~Chele~100；自粉病菌；基因组DNA中图分类号：S436．5文献标识码：A文章编号：1001-0009(2010)10—0167—03甜瓜白粉

2、病(Melonpowderymildew)为甜瓜的常见结构，尤其是细胞壁的组分l_】，致使常规提取DNA方法病，俗称“白毛病”，分布广泛，发生普遍，春秋二季发病较如液氮低温冷冻研磨或石英砂常温研磨破碎细胞壁的重，发病率70％～100％，严重影响甜瓜生产，最高可使SDS和CTAB破壁效果差，而且操作繁琐，费时费力。甜瓜减产6O，同时影响甜瓜的成熟度和含糖量，从而王娜等为避免混入宿主或其它杂物的基因组DNA，影响甜瓜的品质和商品性。该病的病原菌属专性寄生，影响PCR扩增，采用弹孢法收集黄瓜白粉病原菌样本，不能人工培养，且记载较为混乱，郑儒永等口在《中国真在解剖镜下除去杂质后用针将孢

3、子和菌丝压碎破碎细菌志》中为子囊菌亚门真菌白粉菌目单囊壳属瓜类单囊胞壁提取到黄瓜白粉病DNA，贾少锋[]和曾晓葳等[1]壳(Sphaerothecacucurbitae)和自粉属葫芦科白粉菌采用玻璃珠破碎小麦白粉病病菌细胞壁在用CTAB法，(Erysiphecucurbitacearum)，也有研究认为是白粉属二提取到小麦白粉病DNA，高宏华等口采用单斑分离法孢白粉菌(Erysiphecichoracearum)和单囊壳属单囊壳白和直接收集法收集橡胶白粉菌菌体，采用石英砂振荡破粉菌(Sphacelothecafuliginea)，并认为后者较为常壁法、氯化苄法和尿素法提取橡胶白

4、粉菌基因组DNA。见l_2j。上述几种病原菌无性阶段形态相似，而有性阶以上方法所得到的基因组DNA的产量与纯度均不理段的闭囊壳不经常出现，所以给甜瓜白粉病病原菌分类想，而且操作也比较繁琐，不易掌握。鉴定工作造成困难。因此，若要有效防治甜瓜白粉病Chelex-100是1种化学离子螯合树脂，由苯乙烯和害，首先必须澄清其病原体的种类。苯二乙烯共聚体组成，其悬液在碱性环境pH(10～11)近年来随着分子生物学的发展，对于病原菌的鉴和100。C的条件下，可导致细胞膜的破裂和DNA的变性定，采以PCR扩增属、种特异性DNA序列，再与数据库并释放出来Ll，并且Chelex-100能结合许多可

5、能影响下中已有序列进行比对，在形态鉴定基础上，进一步提高一步分析的其它外源物质，并能通过结合金属离子，防鉴定的准确性，缩短了鉴定时间l4。利用白粉病病原止DNA降解1。]。由于Chelexl00能有效除去非核酸有菌无性繁殖阶段的个体一分生孢子和菌丝提取基因组机物，Chelex-lO0提取DNA具有经济、简便、高效等优DNA，PCR扩增相应的属、种特异性DNA序列，鉴定、区点，目前已被广泛用于从全血或血痕、精液或精斑、毛发、植物、动物、细菌细胞等提取DNAe。分形态高度相似的白粉病病原菌已经成为可能。分子生物学鉴定病原菌工作中，DNA提取至关重要。白粉该研究利用Chelex-10

6、0法快速提取白粉病分生孢病病原菌专性寄生、仅能依靠植物体存活，尚不能体外子中的DNA，建立从白粉病病原菌快速提取DNA的方培养，在提取病菌的基因组DNA时，在病株上很难分离法，以期为该菌的分子生物学研究及系统发育分析的提供相应的技术支撑。获得纯的材料，直接影响从中提取基因组DNA的效果。同时，白粉病病原菌分生孢子和菌丝，具有独特的细胞1材料与方法1．1试验材料l_1．1标本采集白粉病病原菌2009年9月在宁夏中第一作者简介：刘建利(1973一)，男，硕士，讲师，现主要从事微生物部干旱带中卫市呜沙镇采集甜瓜主栽品种‘玉金香’发分子生物学研究工作。E-nmil：417523@126

7、．corn。病植株感染白粉病的叶片，带回室内刷下粉状物；25"C基金项目：宁夏回族自治区自然科学基金资助项目(NZ0958)；环境下，10000r／min离心1min除杂；收集橡胶白粉菌2009年宁夏大学生创新性实验资助项目。菌体。采用人工接种的方法将病原菌保存于温室培育收稿日期：2O1O—O2—1O的甜瓜苗上。167·生物技术·北方园艺2010(10)：167～1691．1．2试验仪器和试剂分子量标准【)NA／H”¨j带，大小约600bp，与真菌5．8S-ITSrDNA区段长度吻合。Mar