布渣叶acgs对lps诱导小鼠急性肺损伤的干预作用及机制研究

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1、广东药科大学硕士研究生学位论文分类号：___________密级:__________UDC:___________布渣叶ACGs对LPS诱导小鼠急性肺损伤的干预作用及机制研究姓名：何卓儒学号：2111540034院系：药学院专业：药剂学学位类型：学术学位研究方向：天然药物药效机制研究导师姓名：李坤平副教授论文提交日期：2018年3月30日论文答辩日期：2018年5月12日学位授予单位：广东药科大学二〇一八年五月广东药科大学硕士研究生学位论文InterventionaleffectandmechanismofapigeninC-glycosidesofMicrocospaniculatad

2、uringLPS-inducedacutelunginjuryinmousemodelCandidate：Zhuo-ruHeStudentID：2111540034Affiliation：SchoolofPharmacyAcademicDegreeApliedfor：MasterofMedicineSpeciality：PharmaceuticsSupervisor：AssociateProf.Kun-pingLiDayofDefence：May2018Degree-Conferring-Institution：GuangdongPharmaceuticalUniversityMay201

3、8广东药科大学硕士研究生学位论文广东药科大学硕士研究生学位论文布渣叶ACGs对LPS诱导小鼠急性肺损伤的干预作用及机制研究摘要布渣叶（Microcospaniculata）是药食两用植物，可用作传统中药复方和中草药凉茶的主要原料之一。在报道的布渣叶所含化学成分中，黄酮类成分是布渣叶的主要药理活性成分，其中，布渣叶的芹菜素碳苷（apigeninC-glycosides,ACGs）种类较多且含量较大，可作为布渣叶的活性部位加以研究。目前，尚未有相关报道对布渣叶ACGs进行定量分析及药效机制研究。本研究旨在将布渣叶ACGs进行提取分离及定性定量分析，以布渣叶ACGs作为活性部位，探究其对脂多糖（

4、lipopolysaccharide,LPS）诱导的小鼠急性肺损伤（acutelunginjury,ALI）的干预作用，继而运用代谢组学手段揭示其可能的分子机制。具体实验内容及结果如下：（1）对布渣叶ACGs部位采用柱层析结合半制备型高效液相色谱的方法进行提取分离，用液相色谱-质谱联用技术对分离得到的布渣叶ACGs进行定性分析，与对照品的色谱及质谱数据进行比较，一共鉴定了7种芹菜素碳苷：维采宁-2、异夏佛塔苷、夏佛塔苷、维采宁-1、牡荆苷、异牡荆苷以及异佛莱心苷。利用HPLC对布渣叶ACGs的7种芹菜素碳苷进行了定量分析，结果表明布渣叶ACGs所含的7种芹菜素碳苷约占ACGs的60.83%

5、，为ACGs的主要成分。I广东药科大学硕士研究生学位论文（2）采用小鼠热板法模型、二甲苯致小鼠耳廓肿胀模型、醋酸致小鼠扭体模型等经典模型快速便捷地对布渣叶ACGs的镇痛抗炎作用进行综合评价，结果表明布渣叶ACGs不能延长小鼠的热阈值，不具有中枢性镇痛的药效，但能够显著性地抑制醋酸所致的小鼠扭体以及二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀，表明布渣叶ACG（s10-40mg/kg）具有显著的外周镇痛及抗急性非特异性炎症的效果。（3）建立LPS诱导的小鼠ALI模型，通过肺组织形态学观察，测定预示肺微血管通透性增加及肺部炎症的常见指标，如肺干湿重比、中性粒细胞数量、促炎性细胞因子的含量等，结果表明布渣叶ACGs

6、能够显著地抑制LPS引起的小鼠肺微血管通透性的增加以及肺部炎症反应，对LPS诱导的小鼠ALI具有明显的干预作用。此外，不同剂量的布渣叶ACGs干预LPS诱导的小鼠ALI的药效强度有所不同，大体上呈现出一定的药物剂量依赖性。（4）在药效学研究的基础上，利用气相色谱-质谱联用法对对照组、LPS组及布渣叶ACGs（40mg/kg）小鼠的血清进行了代谢组学分析。根据多元统计分析的结果，综合筛选得到了LPS组和ACGs小鼠血清之间的30个差异代谢物，并将其导入IngenuityPathwayAnalysi（sIPA）数据库进行分子网络通路分析。结果表明布渣叶ACGs（40mg/kg）对LPS诱导小鼠

7、ALI的干预作用可能与抑制丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activatedproteinkinase,MAPKs）信号转导通路及线粒体凋亡通路有关。（5）通过westernblot技术检测对照组、LPS组及布渣叶ACGsII广东药科大学硕士研究生学位论文（40mg/kg）小鼠肺脏中MAPKs信号转导通路以及线粒体凋亡通路上的关键性蛋白分子，结果表明布渣叶ACGs（40mg/kg）能够显著性地抑制LPS激活的TLR4