甘草及其mirna对小鼠肠道菌群和免疫的影响

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1、广东药科大学硕士研究生学位论文分类号：___________密级：__________UDC：___________甘草及其miRNA对小鼠肠道菌群和免疫的影响姓名：徐鹏程学号：2111540130院系：药学院学位类型：专业学位专业：药学硕士研究方向：药物研发与转化导师：邵红伟教授论文提交日期：2018年3月20日论文答辩日期：2018年5月18日学位授予单位：广东药科大学二〇一八年三月广东药科大学硕士研究生学位论文TheEffectsofGlycyrrhizauralensisanditsmiRNAonIntestinalFl

2、oraandIntestinalImmunityCandidate：PengchengXuStudentID：2111540130Affiliation：SchoolofPharmacyAcademicDegreeApliedfor：professionaldegreeofPharmaceuticalSpeciality：PharmaceuticalscienceSupervisor：Prof.HongweiShaoAssistantSupervisor：Prof.WendeLiDayofDefence：May2018Degre

3、e-Conferring-Institution：GuangdongPharmaceuticalUniversityMarch2018广东药科大学硕士研究生学位论文广东药科大学学位论文原创性声明本人郑重声明：本人所呈交的学位论文，系我个人在导师的指导下进行研究工作所取得的成果。除文中已特别加以标注和致谢的地方外，不包含其它个人或机构已经发表或撰写过的研究成果。对本研究做出贡献的其它个人和集体，均已在文中明确说明和致谢。本人充分意识到本声明的法律结果完全由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文使用授权的声明本人完全了解广

4、东药科大学有关保留和使用学位论文的规定，学校有权保留和向有关部门或机构送交本论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库，可以采用影印、缩印或其它复印手段保存和汇编本学位论文。保密论文在解密后适用本声明。论文作者签名：论文导师签名：日期：年月日广东药科大学硕士研究生学位论文甘草及其miRNA对小鼠肠道菌群和免疫的影响摘要背景及目的：前期实验研究发现，miRNA156在甘草水提物miRNA中丰度较高，并经由细胞形态学、细胞增殖情况和免疫相关基因表达探索了甘草miRNA对人免疫细胞的

5、影响。本研究从小鼠肠道菌群、淋巴细胞免疫基因表达、肠道组织转录组表达情况及肠道组织形态观察探究甘草及其miRNA对小鼠的影响，为拓展中药研究新方向奠定了基础。方法：1、制取甘草水提物及对照组金银花水提物，根据前期高通量测序结果中miRNA156序列，设计合成相应的miRNA156mimic及相应的反转录及检测引物，分别通过灌胃不同剂量甘草水提物、miRNA156mimic及尾静脉注射miRNA156mimic进行后续实验。眼球取血并离心获得小鼠血清，利用qRT-PCR检测血清中的miRNA。2、取小鼠新鲜粪便提取基因组DNA，进

6、行16SrDNAV4V5高变区测序，分析各组间门纲目科属水平肠道菌群的差异，并通过α多样性及β多样性分析确定各组间关系及miRNA156在甘草中发挥的作用。3、取小鼠回肠片段，一部分液氮研磨提取RNA用于转录组测序并进行生物信息学分析，另外一部分样品用4%多聚甲醛溶液进行固定，HE染色，光学显微镜观测并保存照片，分析各组样品间的差异。4、取小鼠脾脏组织，用滤网研磨，破红处理获得淋巴细胞，提取总RNA，通过qRT-PCR检测各组间淋巴细胞中转录因子和细胞因子的表达差异。I广东药科大学硕士研究生学位论文结果：1、通过动物实验获取小鼠

7、血液、粪便、脾脏组织及回肠组织。通过qRT-PCR检测血清中miRNA，并未在血清中检测出与miRNA156阳性对照组相同的产物。2、16SrDNAV4V5高变区测序结果表明，小鼠体内的肠道微生物大部分由厚壁菌门，拟杆菌门和变形菌门等构成，与盐水对照组相比，伴随着甘草水提物浓度的增大，拟杆菌门和变形菌门丰度都相对发生下降，而厚壁菌门丰度明显增加；甘草miRNA对厚壁菌门影响不大，但是减少了拟杆菌门，增加了变形菌门，而发生变化的一些细菌已被证明与炎症或营养吸收有关。3、回肠样品转录组测序结果中，联系GO功能富集和KEGG通路分析找

8、到了与免疫密切相关的表达差异基因，并进行了验证。通过观察各组回肠组织HE染色后的病理组织切片发现，除甘草低剂量组、miRNA尾静脉注射组和盐水对照组保持了完整的绒毛结构，高剂量的甘草水提物甚至导致了炎症，miRNA156mimic通过灌胃对回肠产生了炎症作用。4