( 苯并吖啶酮) 乙基咪唑酸酯探针对

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1、第38卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告第1期2010年1月ChineseJournalofAnalyticalChemistry8～12殝檵檵檵檵檵檵檵殝檵檵研究报告檵檵殝檵檵檵檵檵檵檵殝2-(苯并吖啶酮)-乙基咪唑酸酯探针对荧光和质谱的双增敏作用112，311，2，3付艳艳李肖燕孙志伟秦雪芹夏莲22*1，2索有瑞李玉林尤进茂1(生命有机分析重点实验室，曲阜师范大学化学科学学院，曲阜273165)23(中国科学院西北高原生物研究所，西宁810001)(中国科学院研究生院，北京100049)摘要采用3种不同衍生方法对胺类化合物进行标记，比较衍生效率的差别，给出最优方法:5

2、-(2-羟乙基)-(苯并吖啶酮与N，N-羰基双咪唑(CDI)缩合形成的双敏感探针2-(苯并吖啶酮)-乙基咪唑酸酯(BAEIC)与胺的衍生效率最高，产物稳定。BAEIC在N，N-二甲基甲酰胺(DMF)溶剂中以4-二甲氨基吡啶(DMAP)为催化剂，在80℃条件下与胺反应生成的亲核取代物，不仅表现出强烈的荧光，同时具有很强的质谱离子化能力。估算了衍生物在乙腈和甲醇水溶液中百分离子化值δ在5.62%～58.08%和2.14%～56.58%范围内。本方法具有良好的重现性，激发和发射波长为λex/λem=280/510nm，荧光检出限为0.12～0.59μg/L(8.6～79fmol);在线A

3、PCI-MS检出限为1.9～14μg/L(544～825fmol)。关键词液相色谱-质谱;脂肪胺;5-(2-羟乙基)-苯并吖啶酮;2-(苯并吖啶酮)-乙基咪唑酸酯1引言质谱和荧光技术广泛应用于环境科学、毒物学及生命科学等领域中，用于确定诸多生物活性分子的［1～3］含量及化学结构。环境中的胺多是由蛋白质、氨基酸等含氮类有机化合物经生物降解而成。大多［4～8］数胺类化合物在亚硝化剂存在下可生成强致癌性的N-亚硝基化合物，因此，检测环境中的胺具有［9］［10］重要意义。目前，检测胺的方法主要有气相色谱法和离子交换法。尽管方法简便易行，但由于灵敏度低而受到限制。为提高检测灵敏度和改善选择性

4、，采用柱前或柱后衍生化是一种行之有效的手段。［11～14］但测定胺类化合物所用试剂较多，如常用荧光试剂FMOC-Cl衍生化时，过量试剂易造成柱效降低。此外，试剂对脯氨酸和半胱氨酸衍生物表现出很弱的荧光，准确定量存在困难。［15～18］尽管多种胺类测定试剂具有很强的荧光灵敏度，然而它们在APCI-MS中的质谱离子化能力相对低，这对同时获得在线的高灵敏质谱鉴定十分不利。本研究制备了一种能同时满足荧光和质谱增敏的双敏感探针分子。结果表明，2-(苯并吖啶酮)-乙基咪唑酸酯(BAEIC)中间体与胺的亲核取代产物具有高荧光灵敏度及很强的质谱离子化能力。2实验部分2.1仪器与试剂1100离子阱液

5、相色谱-质谱联用仪，配备四元梯度泵、在线真空脱气机、荧光检测器和自动进样器(美国Agilent公司);大气压化学电离源(APCISource);Delta600半制备色谱(美国Waters公司)。F-7000荧光分光光度计(日本Hitachi公司)。12种脂肪胺标准品(美国Sigma公司);乙腈(色谱纯，禹王试剂公司);5-(2-羟乙基)-苯并吖啶酮(HBA，自制);2-(苯并吖啶酮)-乙基咪唑酸酯(BAEIC，自制);N，N-羰基二咪唑(CDI)、4-二甲氨基吡啶(DMAP)等其它试剂均为分析纯。2009-05-09收稿;2009-08-14接受本文系国家自然科学基金(No.20

6、075016)和中科院“百人计划”(No.328)资助项目*E-mail:jmyou6304@163.com第1期付艳艳等:2-(苯并吖啶酮)-乙基咪唑酸酯探针对荧光和质谱的双增敏作用92.2标准溶液配制分别称取12种脂肪胺标品，用乙腈配成浓度为0.1mol/L溶液，相应低浓度12种脂肪胺混合溶液－3(2.0×10mol/L)用N，N-二甲基甲酰胺(DMF)稀释而成。称取0.1156gHBA用DMF定容至10mL，浓度为0.04mol/L。称取0.1532gBAEIC用DMF定容至10mL，浓度为0.04mol/L。称取0.2gDMAP，用DMF定容至10mL，浓度为20g/L。称

7、取0.1gCDI，用DMF定容至10mL，浓度为10g/L。2.3色谱与质谱条件Akasil-C18色谱柱(250mm×4.6mm，5μm，美国艾杰尔科技公司)。流动相A:30%乙腈(含20mmol/LHCOONH4，pH3.74);流动相B:100%乙腈。梯度洗脱程序:0～30min，10%～100%B，保持10min。流速为1.0mL/min，进样量10μL，柱温30℃。荧光激发和发射波长分别为280和510nm。质谱条件:大气压化学电离源(APCIsource)