自噬基因dram1在肝癌细胞中的表达调控机制研究

《自噬基因dram1在肝癌细胞中的表达调控机制研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、上海交通大学。博士学位论文论文题目自噬基因DRAMl在肝癌细胞中的表达调控机制研究学科专业药理学作者姓名倪培华指导教师陆阳教授研究生学号0107109047答辩日期2013年5月上海交通大学2010级博士学位论文上海交通大学博士学位论文lYi2t311115111111111111141113111111911111Y2351439自噬基因DPMMl在肝癌细胞中的表达调控机制研究专业：药理学博士研究生：倪培华学导号：0107109047师：陆阳教授导师组成员：樊绮诗教授胡翊群主任医师杨若林副教授崔永耀副教授资

2、助基金项目：国家自然科学基金(编号：30772233，30873057)；上海市科委基金(编号：11ZRl423100)研究方向：肿瘤发病机制与相关基因的表达调控申请学位级别：博士培养单位：上海交通大学医学院基础医学院2013年5月上海上海交通大学2010级博士学位论文ShanghaiJiaoTongUniversityDissertationforPh．D．DegreeREGULATIoNOFAUTOPHAGYGENE删似ZINLIVERCANCERCELLSMajor：PharmacologyPh．D．C

3、andidate：PeihuaNiSupervisor：’Professor．YangLuSupportedGrants：ResearchOrientation：DegreeAppliedfor：NSFC(China)No．30772233，30873057ShanghaiCommitteeofScienceandTechnologyNo．11ZRl423100MechanismsfortlLrl20rpathogenesisandregulationofgeneexpressionPh．DTraningUn

4、it：SchoolofbasicmedicineMay2013，Shanghai上海交通大学2010级博士学位论文上海交通大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者戳：脆礁辇日期二仍年苫—月占日上海交通大学2010级博士学位论文上海交通大学学位论

5、文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。。保密口，在一年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密耐。(请在以上方框内打“4”)学位论文作者签名：倪饬雒日期：朔3年5月8日／1指导教师签名：产矽?∥日期：弘

6、弦5具／oN上海交通大学2010级博士学位论文自噬基因DRAM

7、l在肝癌细胞中的表达调控机制研究中文摘要背景和目的：在正常情况下细胞通过自噬(autophagy)降解、循环利用胞内受损蛋白和细胞器以维持细胞稳态。在多种肿瘤细胞中自噬既可提高肿瘤细胞对饥饿、感染等应激的耐受能力，维持其生存，又可在肿瘤发展的不同阶段抑制其发生和转移。DRAMl(Damage—regulatedautophagymodulator1)是调节自噬的一个关键因子，特异分布于溶酶体，具有调节自噬小体．溶酶体融合产生自噬溶酶体的功能。DRAMl具有潜在的抑癌功能，在人类许多肿瘤中的低表达可能与启动子区

8、的高甲基化和组蛋白修饰有关，提示DRAMl表达可能与DRAMl基因表达调控有关。为研究自噬与肿瘤之间的关系，本研究以DRAMl为对象，从基因表达调控角度探讨细胞自噬与肝细胞癌发生之间的关系。方法：采用5’RACE方法确定DRAMI在肝癌细胞中启动子转录起始位点。通过DNaseI和MNase核酸酶消化结合CHART-PCR确定DRAMl基因启动子区域的染色质开放状态。采用CllIP实验检测二乙酰化H3、四乙酰化H4、三甲基化H3K4和二甲基化H3K9的相对富集值评价染色质开放程度。构建DRAMl基因启动子区荧光

9、报告载体并转染肝癌细胞检测其相对活性，分析和确定核心启动子的位置。构建一系列上海交通大学20lo级博士学位论文DRAMI核心启动子区域突变或缺失的荧光报告质粒，以确定转录因子结合的位置。采用siRNA转染肝癌细胞分析染色质重塑因子Brgl对DRAMI表达的影响。结果：无血清状态可强烈地诱导DRAMl在肝癌细胞株HepG2和Hep3Bqh表达。确定了D脚M基因启动子的核心序列(．19～+28核苷酸)位