非无菌产品微生物限度检查-微生物计数法

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1、附录×××非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数。当本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料等是否符合规定的微生物限度标准时，应按下述规定进行检验，包括样品的取样量和结果的判断等。除另有规定外，本法不适用于活菌制剂的检查。本检查法可采用替代的微生物检查法，包括自动检测方法，但必须证明替代方法等效于药典规定的检查方法。微生物计数试验应在受控洁净环境环境洁净度10000级下的局部洁净度不低于B100级的单向流空气区域内进行。检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影响供试品中

2、微生物的检出。单向流空气区域、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行监测。如供试品有抗菌活性，应尽可能去除或中和。供试品检查时,若使用了中和剂或灭活剂，应确认其有效性及对微生物无毒性。供试液制备时如果使用了表面活性剂，应确认其对微生物无毒性以及与所使用中和剂或灭活剂的相容性。计数方法计数方法包括平皿法、薄膜过滤法和最可能数法（Most-Probable-NumberMethod，简称MPN法）。MPN法用于微生物计数时精确度较差，但对于某些微生物污染量很小的供试品，MPN法可能是更适合

3、的方法。供试品检查时,应根据供试品理化特性和微生物限度标准等因素选择计数方法，同时所选的方法的供试品用量必须具备检测充足样品量的能力，能够以保证所获得的试验结果能够判断供试品是否符合规定。所选方法的适用性须经确认。计数培养基适用性检查和计数方法适用性试验供试品微生物计数中所使用的培养基应进行适用性检查。供试品的微生物计数方法应进行方法适用性试验，以确认所采用的方法适合于该产品的微生物计数。若检验程序或产品发生变化可能影响检验结果时，计数方法应重新进行适用性试验。表1试验菌液的制备和使用计数培养基适用性检查计数方法适用性试验试验菌液的霉菌和酵霉菌

4、和酵试验菌株需氧菌总数需氧菌总数制备母菌总数母菌总数计数计数计数计数胰酪大豆胨胰酪大豆胨胰酪大豆胨琼脂和胰酪琼脂/胰酪琼脂或胰酪大豆胨肉大豆胨肉汤金黄色葡萄球菌大豆胨肉汤，培养温（MPN法），(Staphylococcus汤，培养温度30～培养温度aureus)度30～35℃，培养30～35℃，培〔CMCC(B)26003)〕35℃，培养时间不超过养时间不超时间18～243天，接种量过3天，接种小时不大于量不大于100cfu100cfu胰酪大豆胨胰酪大豆胨胰酪大豆胨琼脂和胰酪琼脂/胰酪琼脂或胰酪大豆胨肉大豆胨肉汤铜绿假单胞菌大豆胨肉汤，培养温（

5、MPN法），（Pseudomonas汤，培养温度30～培养温度aeruginosa）度30～35℃，培养30～35℃，培〔CMCC（B）10104〕35℃，培养时间不超过养时间不超时间18～243天，接种量过3天，接种小时不大于量不大于100cfu100cfu胰酪大豆胨胰酪大豆胨胰酪大豆胨枯草芽孢杆菌琼脂或胰酪琼脂和胰酪琼脂/胰酪(Bacillus大豆胨肉大豆胨肉大豆胨肉汤subtilis)汤，培养温汤，培养温（MPN法），〔CMCC(B)63501〕度30～度30～培养温度35℃，培养35℃，培养30～35℃，培时间18～24时间不超过养时间

6、不超小时3天，接种量过3天，接种不大于量不大于100cfu100cfu沙氏葡萄沙氏葡萄胰酪大豆胨胰酪大豆胨沙氏葡萄糖糖琼脂，培糖琼脂，培琼脂，培养琼脂（MPN法琼脂或沙氏养温度养温度白色念珠菌温度30～不适用），培葡萄糖肉20～25℃，20～25℃，(Candida35℃，培养养温度30～汤，培养温培养时间培养时间albicans)时间不超过35℃，培养时度20～不超过5不超过5〔CMCC(F)98001〕5天，接种量间不超过525℃，培养天，接种量天，接种量不大于天，接种量不时间2～3天不大于不大于100cfu大于100cfu100cfu10

7、0cfu沙氏葡萄糖沙氏葡萄沙氏葡萄琼脂或马铃胰酪大豆胨胰酪大豆胨糖琼脂，培糖琼脂，培薯葡萄糖琼琼脂，培养琼脂（MPN法养温度养温度黑曲霉脂，培养温温度30～不适用），培20～25℃，20～25℃，(Aspergillus度20～35℃，培养养温度30～培养时间培养时间niger)25℃，培养时间不超过35℃，培养时不超过5不超过5〔CMCC(F)98003〕时间5～75天，接种量间不超过5天，接种量天，接种量天，或直到不大于天，接种量不不大于不大于获得丰富的100cfu大于100cfu100cfu100cfu孢子注：当需用玫瑰红钠琼脂培养基测定

8、霉菌和酵母菌总数时，应进行培养基灵敏度检查，检查方法同沙氏葡萄糖琼脂培养基。菌种及菌液制备菌种试验用菌株的传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的干