碳纳米管的功能化、毒性及用作疼痛基因载体的初步研究

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1、中图分类号UDCR614610硕士学位论文学校代码!Q53三密级公珏碳纳米管的功能化、毒性及用作疼痛基因载体的初步研究PreliminaryStudyontheFunctionalization，CytotoxicityofSingle—-WalledCarbonNanotubesandTheirApplicationsasGeneCarrierforPainTherapy作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导老师：副指导教师：甘丽临床医学麻醉学湘雅三医院黄东教授阎雪彬副教授答辩委员中南大学2013年05月原创性声明IIIIL

2、IIIIIllllllllllllllllllllllllllllllllllllllY2424946本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：_二雄日期：迎年霉月丝日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关

3、部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。储虢型牟导师签名塑吼浒堕月霉日碳纳米管的功能化、毒性及用作疼痛基因载体的初步研究摘要：目的：制备功能化单壁碳纳米管混悬液；评估碳纳米管的细胞毒性；评价鞘内注射功能化单壁碳纳米管／NR2B．siRNA复合物对福尔马林炎性痛小鼠的基因沉默效果。方法：(1)先用表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)和超声方

4、法，分散修饰不溶于水的单壁碳纳米管(SWNT)和羧基化单壁碳纳米管(SWNT-C00H)形成功能化单壁碳纳米管(0SWNT)混悬液，将功能化单壁碳纳米管与NR2B．siRNA以不同质量比混合，静置后高速离心，取上清液行琼脂糖凝胶电泳，通过凝胶成像系统检测功能化单壁碳纳米管与NR2B．siRNA的结合情况。(2)培养Hela细胞，用细胞活力(MTT)法和细胞凋亡实验(Hochest33342)评估SWNTs、SWNT-COOH、CTAB及SWNT-COOH／CTAB的细胞毒性。(3)选取雄性C57BL／6小鼠40只，体重18．22kg，随机

5、分为4组(n：10)：空白组(C组)，阴性对照组(N组)，实验组(A组)，阳性对照组(P组)。分别行鞘内注射，七天后建立福尔马林炎性痛小鼠模型，测定术后1h白发痛行为学改变，取脊髓L4．6节段采用RT-PCR法检测Ⅻ也BmRNA表达。结果：(1)表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)修饰羧基化单壁碳纳米管能形成较稳定的功能化单壁碳纳米管混悬，功能化单壁碳纳米管(fSWNTs)能与NR2B．siRNA很好地结合，且达到饱和时二者结合的质量比为1：1．5．1：2之间。(2)材料学检查表明SWNTs含有更多的金属杂质；细胞活力和细胞凋亡实验

6、发现羧基化修饰的单壁碳纳米管(SWNT_COOH)比原始单壁碳纳米管(SWNTs)毒性小，浓度曲线显示表面活性剂修饰后的羧基化单壁碳纳米管的毒性与表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)相关，在低浓度范围(O．5．50}tg／m1)内CTAB和SWNT．COOH／CTAB基本无细胞毒性(细胞毒性分级为O．1级)。(3)对于福尔马林所致的I相急性痛，所有组间的急性期伤害性反应无差另Ij(P>O．05)，阳性对照组(P组)和实验组(A组)小鼠对福II尔马林所致的II相痛的伤害性反应显著降低(P

7、小鼠脊髓NR2BmRNA表达均低于其他对照组(P

8、马林II相痛行为学。图8幅，参考文献76篇。关键词：功能化单壁碳纳米管(f-SWNT)；十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)；NMDA受体2B亚基(NI匕B)；炎性痛；小干扰RNA(siRNA)分