翼状胬肉中p16基因突变的研究

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1、学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得直昌盘堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名(写)：—参名签字日期：2,1-T；年彭月f日学位论文作者签名(写)：■矿褊签字日期：；年舌月f日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论

2、文被查阅和借阅。本人授权南昌大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编本学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所和中国学术期刊(光盘版)电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发表，并通过网络向社会公众提供信息服务。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者摊(手写)：善易导师签名。手写，：辨签字日期．二牌‘月厂日签字日驯年否月厂日摘要目的：本实验通过检测眼翼状胬肉中p16基因内外显子1(exonl)、外显子2(exon2)的分子遗传学改变，以进一步明

3、确p16基因突变与翼状胬肉之间的关系。方法：共收集40侈J]翼状胬肉组织和同一时期的正常结膜组织样本。组织基因组DNA提取试剂盒提取DNA，应用聚合酶链反应(PolymeraseChainReaction，PCR)从基因组DNAqb分别特异扩增p16基因l、2外显子片段。扩增产物经分离纯化后采用PCR．SSCP法对40例已确诊的翼状胬肉进行p16基Nexonl、exon2的突变研究，用双脱氧链终止法对exonl、exon2发生突变的样本进行DNA测序测定，并分析测序结果。结果：40例翼状胬肉中，通过SSCP分析，p16基因外显子，总突变率为22。5％(9／40)，明显高于正常

4、结膜组(P<0．05)，其中exonl、exon2a、exort2b、exon2c的突变率分别为2．5％(1／40)、0％(0／40)、12．5％(5／40)、7．5％(3／40)，p16基因的两个外显子中，外显子2的改变明显高于外显子I(P<0．05)。p16基因突变与患者职业有关，户外工作患者的突变率明显高于户内工作者，差异有统计学意义(P0．05)。通过测序，9例翼状胬肉样本，相对正常结膜组织，均发生了改变。如：exonl(P6)76碱基处G换成T，exon2b(P32)624碱基

5、处T换成A，exon2c(P14)644碱基处G换成A等。结论：1．翼状胬肉中存在p16基因突变，提示该突变可能参与了翼状胬肉疾病的发生发展；2．翼状胬肉中P16基因外显子2突变明显多于外显子1，提示其在翼状胬肉中发挥作用主要在外显子2中；3．检测出的p16基因突变及其与患者职业的相关性提示了p16基因在翼状胬肉发生发展中的潜在作用，p16基因突变的机制尚未明确，可能与紫外线的作用有关。关键词：翼状胬肉；p16基因；突变；PCR．SSCPABSTRACTobjective：ToinVestigatetheroleofp16genemutationinpterygium．Dis

6、cussionthen】utatjonoftheexon1andexon2ofthep16geneinthepterygiumanditseffectonpterygiumpathogenesis．Methods：Fortvcasesofpterygiumandconjunctivatissueswerecollected·DNAWaSextractedf1．ompterygi唧tissuesandconjunctivatissuesbyDNAextractKits，exonland2ofp16geneof40patientswithpterygiumand40normalc

7、ontrolswere锄plifiedbypolymerasechainreaction(PCR)，andmutationofpl6gene(exonland2)inallSubjectswerescreenedbyPCR-singlestrandconformationpolymorphism(SSCP)．FurthersequencingwasperformedinsampleswithabnormalSSCPresultS，inordertoconfirmthemutationanditsloca