胎盘滋养层细胞分离培养研究进展

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1、万方数据动物医学进展。2012，33(3)：97—100ProgressinVeterinaryMedicine’胎盘滋养层细胞分离培养研究进展付祥龙，张玉玲，翟小伟，陈晓丽，麻雪刚，靳丽君，刘风军。(河南科技大学动物科技学院，河南洛阳471003)摘要：胎盘屏障是营养物质、药物、病毒等从母体进入胎儿的必经之路，与反复自然流产等多种产科疾病有关。滋养层细胞是胎盘屏障的重要组成成分，而滋养层细胞具有内分泌的功能，其增殖、功能调节失常与多种妊娠相关疾病的发生发展有密切关系。为了揭示产科疾病发生、发展的机制，建立滋养层细胞体外培养的模型是必要的，论文就滋养层细胞分离及培养方法

2、进行了综述。关键词：胎盘；妊娠疾病；滋养层细胞；分离；培养中图分类号：R711．4；Q813．1文献标识码：A文章编号：1007—5038(2012)03—0097—04胎盘是哺乳动物妊娠期间由胚胎的胚膜和母体子宫内膜联合形成的母子间交换物质的过渡性器官，含有滋养层细胞、血管内皮细胞、成纤维细胞、霍夫鲍尔(Hofbauer)细胞及血细胞等多种细胞成分，扮演着供给、排泄、代谢、分泌、免疫等角色。滋养层细胞与毛细血管内皮细胞以及二者间的基膜构成胎盘屏障，成为各种营养物质、某些药物、病毒和激素等从母体进入胎儿的必经之路。滋养层细胞的增殖、功能调节失常与多种妊娠相关疾病的发生发

3、展有密切关系，可造成流产、妊娠高血压综合征及胎儿宫内发育迟缓等许多产科疾病。获取足够数量和纯度的细胞，为滋养细胞及相关疾病的研究提供重要的实验基础，促进滋养层细胞及其相关疾病的研究。本文就国内外滋养层细胞分离培养方法进行综述和分析。1滋养层细胞的特点滋养层细胞为一层扁平的上皮细胞，在胎盘形成的过程中，可分化为绒毛滋养层和绒毛外滋养层两种表型，即参与营养物质和代谢产物转运的合体滋养层细胞和具有侵袭性的细胞滋养层细胞。在胚胎的植入过程中，滋养层内的细胞不断侵袭母体子宫，与单个子宫上皮细胞融合形成寿命较短的滋养层细胞，并分泌激素和蛋白质等物质进入母体循环。早孕期的滋养层细胞的

4、增殖能力很强，随着妊娠的进展而逐渐下降，并且细胞滋养层细胞的凋亡率随着妊娠进展而显著增高，而合体滋养层细胞的凋亡率随着妊娠进展则显著下降。2滋养层细胞的分离与纯化方法滋养层细胞的分离与纯化方法大体上分为以下两步：单细胞悬液的制备；细胞的分离与纯化。2．1单细胞悬液的制备目前应用最广泛的是消化分离法。归纳起来有以下6种方法。2．1．1胰酶／DNaseI酶序贯法，先加入2．5g／L胰酶在37℃水浴条件下消化10min，再加入0．2g／LDNaseI酶继续消化10min，最后加入新鲜的胰酶及DNaseI酶混合液(1：1)继续消化20min，总消化时间控制在40min左右。张琴

5、等[11采用此方法获得的细胞悬液以单细胞为主，经台盼蓝染色后，细胞活性近95％，分离效率在90％左右。2．1．2胶原蛋白酶法即用lg／L的胶原蛋白酶在37℃水浴条件下消化3次，15min／次，收集3次的消化液，用100目的细胞过滤器进行过滤，将未消化的组织按此方法再进行消化。VanselowJ等[21通过此法获得了大量的单细胞，细胞界线清楚，胞浆透明，核大呈椭圆形，可见少量含多核的合胞体。2．1．3蛋白酶+胶原酶+DNaseⅣ酶法即用1mg／mL蛋白酶Ⅳ，0．5mg／mL的胶原蛋白酶Ⅳ和50tzg／mL的DNaseⅣ酶的混合液在37℃水浴条件下对组织消化3次，10min

6、／次。StenqvistAC等[3]通过此方法在每克组织中分离得到滋养层细胞数为(1．62±0．35)×106个，经台盼蓝染色后，细胞活性为93．6％±2．3％。2．1．4胰酶+DNaseI酶+中性蛋白酶法即用收稿日期：2011-06—01基金项目：国家自然科学基金项目(30901026)，河南省高等学校青年骨干教师资助计划(2010GGJS-071)作者简介：付祥龙(1987一)，男(蒙古族)，内蒙赤峰人，硕士，主要从事动物生殖疾病与生殖调控研究。*通讯作者万方数据98动物医学进展2012年第33卷第3期(总第225期)胰酶、DNase工酶和中性蛋白酶混合液在37℃水

7、浴条件下对组织进行消化4次，10rain／次。该混合液比较温和，对细胞损伤较小。LeBellegoF等[41用此法获得的细胞悬液分离后，滋养层细胞的纯度为96％。2．1．5胰酶法用1．25g／L的胰酶在37℃水浴条件下对组织进行消化3次，10min／次。BilbanM等[53用此法获得的单细胞悬液经percoll分离纯化后，滋养层细胞纯度可达到98％以上。2．1．6胰酶+DNase工酶法用2．5g／L的胰酶和0．01mg／L的DNaseI混合液对组织消化3次，10min／次。HambruchN等[63将此法与工型胶原酶进行对比，用流式细胞