银杏内酯b对缺氧缺血新生大鼠脑细胞凋亡及神经发生的影响

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1、AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterTheEffectionsofGinkgolideBonApoptosisandNeurogenesisinBrainofHypoxic-ischemicNeonatalRatsByFengweiSHANGSupervisor：Prof．JunWangPediatricsDepartmentofPediatricsTheThirdClinicalCollegeMay2013学位论文原创性声明本人郑重声明：

2、所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：1易t乱巧分日期：劢，墀多月≥日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将

3、本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。1学位论文作者：I匆I刁在匆f日期：加／多年多月易日摘要银杏内酯B对缺氧缺血新生大鼠脑细胞凋亡及神经发生的影响研究生：尚凤伟导师：王军教授专业：儿科学郑州大学第三临床学院河南郑州450052摘要目的新生儿缺氧缺血性脑损伤(Hypoxic．ischemicbraindamage，HIBD)

4、是指各种围生期疾患导致脑组织不同程度缺氧及血流减少甚至停止，从而导致中枢神经系统损伤，是新生儿死亡及儿童癫痫、智力低下和脑性瘫痪的重要原因。神经发生是指神经干细胞(neuralstemcell，NSCs)在特定条件下发生增殖、迁移及进一步分化成有特定表型的神经细胞，并参与神经功能修复的过程。自从证实成体脑组织中存在NSCs以来，研究进展很大。生理情况下NSCs微量增殖，一定条件下如脑缺血、癫痫等可诱导增加，但由于增殖数量较少、迁移过程中发生凋亡及分化为神经元的比例小等原因而不足以修复受损的神经功能。因此，了解脑损伤诱

5、导神经发生机制，寻找促进神经发生增加的措施，将为治疗中枢神经系统疾病带来新的希望。银杏内酯(ginkgolides)是从银杏叶中提取的一类萜内酯类化合物，药理作用广泛，在中枢神经系统，可通过降低损伤后神经细胞凋亡促进新生血管形成等机制保护并修复受损的神经功能。近年研究发现，银杏内酯B(ginkgolidesB，GB)n--丁促进体外培养的NSCs增殖、迁移及定向分化。本课题通过制作HIBD新生大鼠模型，应用GB进行干预，观察新生大鼠HIBD摘要后细胞凋亡情况及内源性神经干细胞增殖分化的改变，研究GB对其发生的影响，为

6、NSCs定向诱导分化研究及临床应用提供理论依据。方法清洁级新生7日龄SD大鼠200只，随机分为假手术组48只、HIBD组52只、GB低剂量组50只及GB高剂量组50只，最终纳入数据分析的大鼠每组均为48只。经典Rice法制作HIBD动物模型，在造模过程中及造模后观察动物行为学改变。GB低剂量组与GB高剂量组分别按5mg／kg、10mg／kg腹腔注射GB，其它两组注射等量生理盐水(10ml／kg体重体积注射量)，每天一次共5天。各组随机选取6只分别在造模后3d，7d，14d，28d处死：(1)规定时间点断头取脑处死大鼠

7、，荧光定量PCR法检测各时间点Caspase．3、VEGF、FoxglmRNA的表达水平，2-AAa。法计算相对表达量，比较各组表达差异；(2)按规定时间点处死前给予腹腔注射溴脱氧尿嘧啶核苷(BromodeoxvuridineBrdU)标记新生细胞，剂量50mg／kg，1次／12h，共5次，最后一次腹腔注射BrdU4h后处死；分别以巢蛋白(Nestin)、神经元烯醇化酶(neuronspecialenolase，NSE)和胶质纤维酸性蛋白(glialfibrillaryacidicportein，GFAP)标记神经干

8、细胞、神经元和星形胶质细胞，免疫组化检测各时间点海马齿状回BrdU阳性细胞数，免疫荧光双标法检测各时间点皮层BrdU+／Nestin+、BrdU+／GRⅦ+、BrdU+／NSE+细胞数，观察各组阳性细胞的定位及半定量结果的差异。定量结果数据以F±S表示，采用SPSS17．0统计软件分析，多组问计量资料比较采用单因素方差分析，差异有统计学意义者进