麻疹核蛋白基因在大肠杆菌和家蚕中的表达及鉴定

《麻疹核蛋白基因在大肠杆菌和家蚕中的表达及鉴定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、论文题目：麻疹核蛋白基因在大肠杆菌和家蚕中的表达及鉴定答辩委员会主席：专钰永答辩委员会眠]埏整池颦论文答辩日期：溯毒，6一f温州医学院硕士学位论文目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1ABSTRACT⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯．3引言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。4主要研究路线⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。8第一章麻疹病毒核蛋白基因的原核表达及鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．91．实验材料⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。91．1实验毒株、载体及菌株⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．91．2实验主要试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。91．3主要实验溶液的配制：⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。91．4常用实验仪器设备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。131．S引物⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。142实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。1S2．1表达载体构建图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。152．2麻疹病毒总RNA提取⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯152-3一步法RT-PCR扩增目的基因⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．162．4RT-PCR产物切胶回收⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯162．5RT-PCR产物与PMDl9-T载体的连接⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．172．6E．COLI热击感受态细胞的制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯172．7重组质粒的转化和蓝白斑筛选试验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。182．7．1重组质粒的转化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．18温州医学院硕士学位论文2．7．2蓝白斑试验筛选阳性克隆质粒⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯182．8重组质粒的鉴定⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯182．8．1菌落PCR法鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。182．8．2碱法少量快速抽提质粒DNA⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯182。8-3重组克隆质粒酶切鉴定和测序⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯192．8．4重组质粒的测序⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯192．9原核表达载体的构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．202．9．1目的片段与pET-28a(+)载体的连接⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。2O2．9．2连接产物的转化和鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯212．10重组蛋白的诱导表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

5、⋯⋯⋯212．11检测分析重组蛋白表达情况及表达产物存在形式⋯⋯⋯⋯．．212．11．1SDS．PAGE电泳分析蛋白表达情况⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯212．11．2表达产物存在形式的检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．232．12重组蛋白的大量表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．232．12．1重组蛋白的大量诱导表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．232．12-2包涵体蛋白的洗涤及变性处理⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。232。13镍柱亲和层析纯化重组蛋白⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯242．13．1装填镍柱⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．242．1

6、3．2Ni+．NTA树脂预处理及再生⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。242．13．3Ni+．NTA树脂柱纯化蛋白⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯252．14BRADFORD法测定蛋白浓度⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯252．15WESTERNBLOT鉴定重组蛋白表达情况⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯26温州医学院硕士学位论文2。16间接酶联免疫吸附(ELISA)法检测重组蛋白抗原性⋯⋯⋯263．实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．。273．1麻疹核蛋白基因的扩增⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯273．2PMDl9-T-MV-NA／PMD

7、l9-T-MV-NB的酶切鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯283．3重组质粒PET-MV-NA／PET-MV-NB的鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．283．4重组蛋白表达条件优化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯293．5重组蛋白的纯化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。3O3．6MV-NA蛋白和MV-NB蛋白的WESTERNBLOT鉴定⋯⋯⋯⋯⋯313．7BRADFORD法测定蛋白浓度⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯323．8表达重组蛋白的间接法ELISA检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．324．分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯33

8、第二章真核表达麻疹病毒核蛋白⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。361．实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．361．1实验质粒、病毒、细胞、菌株和家蚕⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．361．2主要试剂与工具酶⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3