人细胞色素c基因在大肠杆菌中的克隆和表达及活性测定

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1、!""#$%%&’&()(中国生物化学与分子生物学报)%%+年,月*#$$’+,&%-.*/0123245671895:;057?81@A592<6987;0595B?$（CD）：D&EFD,$"""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""人细胞色素!基因在大肠杆菌中的克隆和表达及活性测定申峰$），刘明$），吕昌莲$），王秀宏$），周宏博$），周虹)）!（$）哈尔滨医科大学生物化学与分子生物学教研室，哈尔滨$E%%,(；)）军事医学科学院野战输血研究所，北京$%%,E%）摘要通

2、过S*M方法，从人胎儿心肌基因组O#Q中得到R72<基因（有$个内含子），剔除内含子后，得到细胞色素<基因的编码序列L测序结果表明，该基因与X21;81Y中报道的人细胞色素<基因核苷酸顺序完全一致L将其插入原核表达载体RIH+8的!"#!和$%&@"位点之间构建RIH+8’<重组质粒，并成功转化入’()*+%;Z)（$OI+）中L经!SHX诱导表达后，$E["O"’SQXI分析，可观察到$条与细胞色素<蛋白分子量相符的电泳条带L23>271印迹结果显示，该条带与小鼠抗人<单克隆抗体!BX)P发生特异反应，证实为人细胞色素<的前体蛋白L体外使血红素与该

3、前体蛋白结合生成完整的人细胞色素<蛋白，其耗氧量在不同浓度具有与反应时间的线性关系，为研究人细胞色素<结构和功能关系奠定了基础L关键词人细胞色素<，克隆与表达，23>271印迹，活性测定中图分类号.&,，.EEC"#$%&%’，()*+,--&$%$./012%"34$!5+$1,!6,%,&%!"#$%&2%784-9!4&:&439--23"VI#U21B$），Z!]A01B$），Z^*/81B’9081$），Q#X_06’/51B$），GV‘]V51B’P5$），GV‘]V51B)）!（$）,#-./01#&0*23%*)4#1%50/6.&"7*+#)8+.

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