hrd-1与derlin-1在胃癌中表达及对葡萄糖转运蛋白glut-1表达的影响

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1、隶劫太·璺医学硕士学位论文Hrd．1与Derlin．1在胃癌中表达及对葡萄糖转运蛋白GLUT-1表达的影响本论文获国家自然科学基金(81171363)资助1(GLUT-1)ANDI删!、EXPRESSIONOFHRD．．1ANDDERLIN．．1INGASTRIC--C殛NCERADissertation(Thesis)SubmittedtoSoutheastUniversityFortheAcademicDegreeofMasterofMedicalScienceBYXuQinfengSupervisedbySupervisedProf．Guo肠nhuaSoutheastUniversit

2、yMay2013东南大学学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得东南大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：日期：东南大学学位论文使用授权声明东南大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相～致。除在保密期内的保密论文外

3、，允许论文被查阅和借阅，可以公布(包括以电子信息形式刊登)论文的全部内容或中、英文摘要等部分内容。论文的公布(包括以电子信息形式刊登)授权东南大学研究生院办理。研究生签名：翮龇盘握嗍玉!址：岁中文摘要Hrd．1与Derlin．1在胃癌中表达及对葡萄糖转运蛋白GLUT-1表达的影响东南大学医学院研究生许秦风导师郭万华摘要目的：探讨葡萄糖转运蛋白GLUT-1及E3泛素连接酶Hrd．1、逆转运蛋白Derlin．1在胃癌中的表达及意义，及三者之间的相互关系，并进一步探究胃癌中Hrd．1及Derlin．1对于GLUT-1的调控机制。方法：应用免疫组化及免疫印迹方法检测人类胃癌组织和癌旁组织中GLUT-

4、I、Hrd．1、Derlin．1的表达差异。在人类胃癌SGC．7901细胞中分别过表达Derlin-1与GLUT-1、RNAi技术沉默Derlin．1，并应用免疫荧光及免疫印迹法检测蛋白表达水平变化；MTT法检测Derlin一1表达情况对于SGC．7901细胞增殖的影响；使用免疫共沉淀技术检测Derlin．1与GLUT-1结合情况。结果：1．免疫组化及免疫印迹法发现胃癌组织中GLUT-1、Hrd．1、Derlin．1蛋白表达水平均高于癌旁组织；GLUT-1主要表达于细胞膜上及部分胞质内，与胃癌的大小及病理分型相关；Derlin。1及Hrd．1主要表达于细胞质中，Deflin．1表达与胃癌的淋

5、巴结转移相关；GLUT-1在胃癌的表达水平与Hrd一1及Derlin一1的表达水平负相关。2．使用RNAi技术敲降Derlin．1在人胃癌细胞SGC．7901中的表达，MTT结果显示，siRNA介导的Derlin一1表达下调对SGC。7901细胞的增殖无明显影响；同时过表达SGC．7901细胞中的Derlin-1对其增殖亦未见明显影响。3．在SGC一7901细胞中共转染EGFP-myc．GLUT-I质粒和pcDNA3．1．Derlin-1及单独转染EGFP-myc-GLUT-1质粒，转染48小时后提取细胞裂解上清液，进行免疫共沉淀实验，用anti—myc抗体免疫沉淀Deflin．1，随后使用

6、免疫印迹法检测免疫沉淀物发现共转染组和单独转染组均有Derlin．1蛋白条带显示，证明GLUT-1和Deflin．1蛋白存在着相互结合作用。4．在人类胃癌细胞SGC．7901内共转染EGFP．myc．GLUT-1和pcDNA3．1．Derlin．1以及EGFP—myc—GLUT-I和pSilencer-Derlin一1重组载体，同时使用了单独转染EGFP．myc．GLU％I的以及EGFP—myc．GLUT-1分别与该两种重组载体对应的空白载体共转染的人类胃癌细胞SGC一7901作为对照，转染48小时转染EGFP．myc．GLUT-1和pcDNA3．1．Derlin．1组与共转染查堕查兰堡主堂

7、垡堡茎EGFP．myc—GLUT-1和对应空载载体组比较，Derlin-1表达明显增高，而GLU％I表达随之降低；共转染EGFP—myc—GLUT-1和pSilencer-Derlin一1重组载体组与共转染EGFP-myc·GLUT-I和对应空载载体组比较，Derlin．1表达明显降低，而GLUT．I表达随之增高；共转染EGFP—myc．GLUT-I和两种空载质粒的两组与单独转染EGFP．myc．GLUT-I