mir-301a在胃癌中的表达及意义和诱导胃癌细胞克隆形成、侵袭和迁移的机制

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1、论文题目：miR一301a在胃癌中的表达及其意义和诱导胃癌细胞克隆形成、侵袭和迁移机制答辩委员会主席：郑树森答辩委员会成员：郑树森浙江大学医学院附属第一医院张启瑜温州医学院附属第一医院黄东胜浙江省人民医院张勤浙江省人民医院王跃东浙江大学医学院附属第二医院论文答辩日期：2013年5月21日温州医学院博士学位论文目录中文摘要(关键词>⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯2英文摘要(关键词)⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯”““⋯⋯⋯⋯⋯1／刖吾⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯”““⋯⋯⋯⋯⋯第一部分miR-301a在胃癌细胞及组织中的表达及其临床病理意义一、材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9二、结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯20第二部分miR-301a体外对胃癌细胞克隆、侵袭和迁移能力影响研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯38一、材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯38二、结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4l第三部分miR-301a对靶基因NF—l(B蛋白表达的调控一、材

3、料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯51二、结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯60分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯65小结⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯”73参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯74致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯··8l综述及参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯82学位论文独仓吐性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯94温州医学院博士学位论文miR-30la在胃癌中

4、的表达及意义和诱导胃癌细胞克隆形成、侵袭和迁移的初．制中文摘要研究背景：在全球，胃癌的死亡率仅次于肺癌居第二位，在我国也是死亡率最高的恶性肿瘤之一，其5年生存率低于40％，早期诊断和治疗是提高生存率的重要手段，因此寻找理想的早期诊断标记物和治疗靶点，对改善患者生存率有重要意义。MicroRNA是一类内源性非编码的功能性RNAs，大约2卜25个核苷酸，它通过调节mRNA的翻译或降解而起到致癌或抗癌作用。其在肿瘤中的异常表达体现了其与人类肿瘤的形成、发生、发展的密切相关，针对miRNA与肿瘤的研究充分体现了miRNA参与基因调

5、控的复杂性，它们调控的靶基因关系着肿瘤细胞的分化、增殖、克隆、侵袭等，因此以miRNA为切入点，研究胃癌形成、发展、浸润和转移过程中的作用及机制，为胃癌早期诊断、预后评估和靶向药物治疗等开辟了新的途径。目的：检测miR-30la在人胃癌细胞系(AGS、MKN一28、BGC一823、HCG一27、SGC一7901和MKN一45)、人正常胃上皮细胞GES-I表达，在人胃癌组织的表达及其临床病理意义；探讨miR-30la对人胃癌细胞SGC一7901、HCG一27细胞克隆、侵袭和迁移的影响以及对靶基因NF-kB蛋白表达的调控。方法

6、：提取人胃癌细胞系(AGS、MKN一28、BGC一823、HCG一27、SGC一7901和MKN一45)、人正常胃上皮细胞GES-I及29例人胃癌组织及其配对的癌旁非肿瘤胃粘膜组织的miIiNAs，按miScriptReverseTranscriptionKit合成cDNA，miR-30la、靶基因NF—kB和U6引物购自QIAGEN公司，用ABI7500FAST型荧光定量PCR仪进行实时荧光定量PCR。将5．0×105个细胞／孔接种于6孔培养板中，37℃、混匀，5％C02孵育箱静置培养24小时。按Lipofectamin

7、e2000说明书将NegativeControlB和miR-30la抑制物各2ul(50pmol／111)转入SGC一7901和HCG一27细胞，转染24小时后荧光显微镜检测转染效率、RT—PcR检测miR-30ta和靶基因N卜kB的表达水平，并观察细胞克隆、侵袭和迁移能力。转染72小时后WesternBlot法检测靶基医N卜kB的表达水平。应用原位杂交技术检泓miR-30ta在304例石蜡固定人胃癌组织芯片标本的表达水平。2温州医学院博士学位论文结果：miR-30la和靶基因在人胃癌细胞株AGS、Ⅷ(N一28、BGC一8

8、23、HCG一27、SGC一7901和MKN-45的表达量显著高于人正常胃上皮细胞GES-1的表达量，miR-30la在76．67％(23／30)的胃癌组织高表达。人胃癌细胞株SC七一7901和HCG-27转染miR-30la抑制物24小时后miR-30la的表达显著降低。转染miR一301a抑制物48