CXCR12在胃癌细胞增殖、迁移和侵袭中的作用及机制

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1、中图分类号邸6UDC610博士学位论文学校代码lQ533CXCRl／2在胃癌细胞增殖、迁移和侵袭中的作用及机制TheroleandmechanismofCXCR1／2inproliferation，migrationandinvasionofgastriccancercells作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：副指导教师：王俊普基础医学病理学与病理生理学基础医学院文继舫教授李景和副教授敝答辩日期丛量兰7答辩委员会主越中南大学二。一三年五月原创性声明IUlllllllIIIIIIIlY2

2、422547本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：量孽盔日期出廛年i月吐日，学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以

3、公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。⋯名一签名穆一上罗CXCRl／2在胃癌细胞增殖、迁移和侵袭中的作用及机制摘要：背景胃癌是人类常见的恶性肿瘤之一，国际癌症研究协会最新数据显示其发病率及死亡率高居恶性肿瘤前列。胃癌细胞增殖失控、侵袭、转移及耐药是导致其不良预后的重要原因。胃癌治疗的突破依赖于我们对胃癌发生发展复杂分子机制的深入探索。“非可控性炎症”在胃癌的发生发展

4、进程中扮演着重要角色，在炎症与肿瘤动态网络的可调性与鲁棒性(robustness)辩证关系中，趋化因子受体与其配体是一类重要的非可控性炎症因素。最近有研究发现，趋化因子受体家族在数种肿瘤细胞中高表达，在肿瘤的发生、增殖、生长、侵袭、转移、血管新生及耐药等方面发挥重要的调控作用。CXCRl／2即CXCRl和CXCR2，二者具有75．8％的高度相似序列，属于趋化因子受体家族。最初研究表明CXCRl／2主要表达于中性粒细胞，被激活后调节信号通路下游的蛋白靶点(如NF．kB，AP．1，MMP9等)，参与化学趋化、钙

5、离子流动、细胞增殖、运动及血管新生的调节等。目前，有研究显示CXCRl／2在某些肿瘤进程中发挥一定的作用。而有关CXCRl／2在胃癌增殖生长、侵袭及转移中扮演何种角色?许多的研究表明MAPK／ERK和P13K／AKT通路参与调控肿瘤的生物学行为，CXCRl／2是否与MAPK／ERK和P13K／AKT通路在胃癌调控中有关联?哪些与胃癌细胞凋亡、增殖生长及侵袭转移相关的指标参与到CXCRl／2调控通路中?这些问题值得但尚未被深入研究。目的本课题着眼于一类重要的非可控性炎症因素——趋化因子受体CXCRl／2：1．

6、研究CXCRl／2在胃癌中的表达及其与临床病理特征的关系。2．探究靶向阻断CXCRl／2和CXCRl基因沉默及过表达对胃癌细胞生物学行为的影响及其机制。3．为利用CXCRl／2设计靶向药物治疗胃癌提供有价值的实验基础。方法1．探讨CXCR／2表达与临床病理特征及与调控胃癌细胞生物学行为相关指标的相关性(1)收集胃癌及癌旁组织标本69例，采用免疫组织化学方法(IHC)检测，并分析CXCRl／2表达与临床病理特征之间的相关性；(2)分析CXCRl／2表达与ERK和AKT磷酸化、凋亡增殖生长(bcl．2，bax，

7、CyclinD1，EGFR和ki．67)、血管新生(VEGF和CD34)及侵袭转移(MMP．9，MMP．2，TIMP．2和E．cadherin)等指标的相关性。2．探讨靶向阻断CXCRl／2对胃癌生物学行为的影响及其机制建立体内外Repertaxin(一种CXCRI／2小分子特异性抑制剂，能阻断CXCRl／2与其配体结合)靶向阻断胃癌细胞CXCRl／2体系：Repertaxin单独或联合化疗药物5．氟尿嘧啶(fluorouracil，5-FU)应用到培养的胃癌细胞MKN45和裸鼠成瘤模型中。(1)MTT实验

8、、平板克隆形成实验、流式细胞周期检测及凋亡检测观察胃癌细胞增殖、细胞周期和凋亡情况变化；(2)划痕实验、迁移实验和侵袭实验比较细胞迁移及侵袭性；(3)real．time．PCR检测凋亡增殖生长(bcl．2，bax，CyclinDl，EGFR和ki．67)、血管新生(VEGF)及侵袭转移(MMP．9，MMP．2，TIMP．2和E．cadhedn)指标的mRNA水平；(4)Western．blotting检测CXCR