KLD-12多肽_rhBMP-2纤维凝胶复合BMSCs诱导异位成骨的实验研究.pdf

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1、分类号：密级：学号：2015202114单位代码：10759石河子大学硕士学位论文KLD-12多肽/rhBMP-2纤维凝胶复合BMSCs诱导异位成骨的实验研究学位申请人杜龑指导教师孙建华申请学位门类级别医学硕士学科、专业名称外科学研究方向脊柱外科所在学院医学院中国·新疆·石河子2018年5月ExperimentalstudyofinduceingectopicossificationofKLD-12polypeptide/rhBMP-2nanofibergelcombinewithBoneMar

2、rowMesenchymalStemCellsADissertationSubmittedtoShiheziUniversityInPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofMedicineByDuYan(SpineSurgery)Supervisor:SunJianhuaMay,2018摘要目的：探讨KLD-12多肽/重组人类骨形态发生蛋白-2（recombinanthumanbonemorphogeneticprotei

3、n2，rhBMP-2）纤维凝胶复合兔BMSCs在兔臀肌内的成骨效果。方法：取6月龄新西兰大白兔48只，体重3.0-3.5kg，雌雄不限，密度梯度法分离培养兔BMSCs，随机分为A、B、C、D4组，每组12只。A组（实验组）：兔臀肌植入KLD-12多肽/rhBMP-2/BMSCs凝胶；B组（阳性对照组）：臀肌内植入KLD-12多肽/rhBMP-2凝胶；C组（阳性对照组）：臀肌内植入rhBMP-2；D组（阴性对照组）：臀肌内植入KLD-12凝胶。分别于术后4周、8周、12周行X线、Micro-CT、

4、大体观察、组织形态学染色、碱性磷酸酶（ALP）活性检测。结果：（1）X线：A、B、C三组在植入后4周，兔臀肌均出现成骨表现，成骨区面积随时间推移逐渐增大；D组：无成骨影像表现。（2）Micro-CT结果：骨块形状不规则，外层骨质向骨块中央部不规则延伸。随时间推移，各组骨体积分数、骨小梁数量、骨小梁厚度、组织骨密度逐渐增大。12周时，骨体积分数BV/TV（%）：A组24.274±1.034、B组21.141±0.998、C组20.163±1.096；骨小梁数量TB.N（个/mm3）：A组6.869

5、±0.247、B组5.616±0.232、C组5.098±0.199；组织骨密度TMD(mg/cm3)：A组409.363±12.933、B组370.366±9.733、C组350.396±13.379；骨小梁厚度Tb.Th(mm)：A组0.104±0.006、B组0.092±0.004、C组0.083±0.005，以上Micro-CT各指标测得的数据，A组与B组相比、A组与C组相比、A组与B、C两组相比，差异均有统计学意义（P＜0.05）（3）大体标本观察：4周时：A、B、C三组可见钙化结节，

6、钳夹硬度均较低；8周、12周时：A、B、C三组骨组织硬度均较高；D组：未发现骨组织（4）HE染色：100×，第4周时：A组可见编织骨和类骨质，B组可见少量形成的骨小梁，C组可见少量编织骨和类骨质；8周时：A组可见较成熟板层骨及少许编织骨，B组可见大量编织骨，C组可见少量成熟板层骨及大量编织骨；12周时：A、B两组为较成熟骨组织，C组为较成熟骨组织和少量编织骨。（5）姬姆萨染色（Giemsa染色）：4周时：A组可见少量的深蓝色的成熟骨组织，B组可见较多量湖蓝色类骨质，C组可见浅蓝色新矿化骨；8周时

7、：A组可见较多量深蓝色成熟骨组织，B组可见少量深蓝色成熟骨组织，C组可见少量深蓝色成熟骨组织，并见较多量的浅蓝色新矿化骨；12周时：A组可见大量深蓝色成熟骨组织，B组可见较多量深蓝色成熟骨组织，C组可见深蓝色成熟骨组织和浅蓝色新矿化骨。（6）ALP活性（金氏单位/gprot）：12周时：A组20.236±0.351、B组17.697±0.533、C组16.981±0.246，A组与B组相比、A组与C组相比、A组与B、C两组相比，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：KLD-12多肽/rhBM

8、P-2凝胶复合BMSCs在臀肌内成骨活性良好，在KLD-12多肽凝胶内，BMSCs与rhBMP-2可以相互促进成骨活性。【关键词】KLD-12多肽；rhBMP-2；骨组织工程；异位成骨IAbstractObjective:ToinvestigatetheectopicosteogenicactivityofKLD-12polypeptide/recombinanthumanbonemorphogeneticprotein-2(rhBMP-2)nanofibergelcombinewithbone