异形胞分化蓝细菌dnaa温度敏感型突变体的构建

《异形胞分化蓝细菌dnaa温度敏感型突变体的构建》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、西北植物学报，2010，30(3)：0459—0465ActaBot．Borea1．-Occident．Sin．文章编号：1000—4025(2010)03—0459—07日异形胞分化蓝细菌dnaA皿度敏感型突变体的构建魏新元，丑敏霞，闻盼盼(1西北农林科技大学食品科学与工程学院，陕西杨陵712100；2西北农林科技大学生命科学学院，陕西杨陵712100)摘要：以能分化异形胞的蓝细菌(Anabaenasp．PCC7120)为材料，采用重组PCR在体外对控制DNA复制起始的dnaA基因进行定点突变

2、后克隆到整合质粒中，再通过三亲本杂交将整合质粒转移到AnabaenaPCC7120中，以分离和筛选温度敏感型突变体。结果成功获得AnabaenaPCC7120dnaA高温敏感性突变体。研究表明，利用重组PCR技术可在体外实现对AnabaenaPCC7120的dnaA的定点突变，并可通过同源重组双交换成功实行整合质粒中突变基因对野生型基因的置换，使突变基因插入到细胞染色体中，进而成功构建温度敏感型突变菌株。关键词：温度敏感型；dnaA；定点突变；异形胞中图分类号：Q789文献标识码：AConstr

3、uctionofdnaATemperature—SensitiveMutantsofHeterocystDifferentiatedCyanobacteriumWEIXin—yuan，CHOUMin—xia，WENPan—pan(1CollegeofFoodScienceandEngineering，NorthwestA&FUniversity，Yangling，Shaanxi712100，China；2CollegeofLifeScience，NorthwestA&FUniversity，Ya

4、ngling，Shaanxi712100，China)Abstract：Toconstructtemperature-sensitivemutantofheterocystdevelopmentalcyanobacteriumAnabaennsp．PCC7120，mutationswereintroducedintodnaA，theinitiationgeneofDNAduplication，bvmeansofre—combinantpolymerasechainreaction(PCR)inv

5、itro．ThemutationaldnaAwasinsertedintointegrationplasmidandtheresultplasmidwassubsequentlytransferredintoAnabaenaPCC7120throughthree—parentCOnjugationtoisolateandscreenthetemperature—sensitivemutants．Theresultshowedthatthehightern—perature—sensitivemu

6、tantsofAnabaenaPCC7120weresuccessfulconstructed．ThenaturaldnaAinA口一baenaPCC7120chromosomecouldbereplacedbymutativednaAthroughhomologousrecombinationdouble—crossoverfollowingoverlapPCRmediatedsite—directedmutagenesisofdnaAinvitro．Thestudvsuggestedthat

7、temperature—sensitivemutantcouldbeconstructedbydnaAmutating．Keywords：temperature—sensitive；dnaA；site—directedmutation；heterocyst原核生物细胞分化与染色体复制之间的相互关密的联系。DNA复制起始是染色体复制的关键步系受到普遍关注。对Bacillussubtilis芽孢的形成骤，DnaA是染色体复制的起始蛋白，它通过与和Caulobactercrescentus二态性的研究

8、发现，细菌DNA复制起始区的保守序列oriC结合，形成细胞分化与细胞周期以及DNA复制之间存在着紧DnaA—oriC复合物，从而启动染色体的复制Ⅲ。在收稿日期：2009—10—10；修改稿收到日期：2OlO—O2—26基金项目：陕西省自然科学基金(SJ08B12)；西北农林科技大学人才g~(01140408)作者简介：魏新元(1971一)，男，讲师。博士，主要从事微生物学和分子生物学研究。E—mail：wheixinyuan@126．com460西北植物学报Bacillussubtilis中，d