表达猪圆环病毒2型sh1分离株cap蛋白的重组杆状病毒的构建与鉴定

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1、中国兽医科学２０１０，４０（１１）：１１５６－１１６０ＣｈｉｎｅｓｅＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＳｃｉｅｎｃｅ中图分类号：Ｓ８５２．６５９．２文献标志码：Ａ文章编号：１６７３－４６９６（２０１０）１１－１１５６－０５表达猪圆环病毒２型ＳＨ１分离株Ｃａｐ蛋白的重组杆状病毒的构建与鉴定李文良，王先炜，马涛，李玉峰，姜平＊（南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室，江苏南京２１００９５）摘要：通过ＰＣＲ方法扩增完整的猪圆环病毒２型（ＰＣＶ２）ＯＲＦ２基因，随后将其克隆到Ｂａｃ－ｔｏ－Ｂａｃ杆状病毒表达系统ｐＦａｓｔＢａｃＴＭＨＴＢ载体中，将筛选获得的阳性重组质粒ｐＦ－Ｃａｐ转化至

2、含有杆状病毒穿梭载体的ＤＨ１０Ｂａｃ感受态大肠杆菌中，经蓝白菌落筛选和ＰＣＲ鉴定，获得重组表达载体ｒＢａｃ－Ｃａｐ。在脂质体介导下转染处于对数生长期的Ｓｆ９昆虫细胞，获得重组杆状病毒ｒＡｃ－Ｃａｐ。Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ和间接免疫荧光试验结果表明，成功构建了表达ＰＣＶ２Ｃａｐ蛋白的重组杆状病毒，表达的蛋白具有良好的反应原性，这为进一步研究Ｃａｐ蛋白的功能及免疫学特性奠定了基础。关键词：猪圆环病毒２型；ＯＲＦ２基因；杆状病毒表达系统ＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇＣａｐｐｒｏｔｅｉｎ

3、ｏｆｐｏｒｃｉｎｅｃｉｒｃｏｖｉｒｕｓｔｙｐｅ２ＳＨ１ｉｓｏｌａｔｅＬＩＷｅｎ－ｌｉａｎｇ，ＷＡＮＧＸｉａｎ－ｗｅｉ，ＭＡＴａｏ，ＬＩＹｕ－ｆｅｎｇ，ＪＩＡＮＧＰｉｎｇ（ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＡｎｉｍａｌＤｉｓｅａｓｅｓＤｉａｇｎｏｓｔｉｃｓａｎｄＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙｏｆｔｈｅＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ／ＮａｎｊｉｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ２１００９５，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＴｈｅｃｏｍｐｌｅｔｅＯＲＦ２ｇｅｎｅｗａｓａｍｐｌｉｆｉｅｄｆｒｏｍｐｏｒｃｉｎｅｃｉｒｃｏｖｉｒｕｓｔｙｐｅ２（ＰＣＶ２）ＳＨ１ｉ

4、ｓｏｌａｔｅＴＭｂｙＰＣＲａｎｄｔｈｅｎｃｌｏｎｅｄｉｎｔｏｔｈｅｄｏｎｏｒｖｅｃｔｏｒｐＦａｓｔＢａｃＨＴＢｏｆＢａｃ－ｔｏ－ＢａｃＢａｃｕｌｏｖｉｒｕｓＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎＳｙｓ－ｔｅｍ．Ａｆｔｅｒｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇａｎｄａｎａｌｙｓｉｓ，ｔｈｅｐｕｒｉｆｉｅｄｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｌａｓｍｉｄｐＦ－ＣａｐｗａｓｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄｉｎｔｏＥｓｃｈｅ－ｒｉｃｈｉａｃｏｌｉＤＨ１０Ｂａｃｃｏｍｐｅｔｅｎｔｃｅｌｌｓｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓｓｈｕｔｔｌｅｖｅｃｔｏｒ．Ｔｈｅｗｈｉｔｅｃｏｌｏｎｉｅｓｗｅｒｅｓｅｌｅｃｔｅｄａｎｄｔｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａ

5、ｎｔｂａｃｍｉｄｒＢａｃ－ＣａｐｗａｓｖｅｒｉｆｉｅｄｂｙＰＣＲ．ＴｈｅｎｔｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｂａｃｍｉｄｗａｓｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｉｎｔｏＳｆ９ｉｎｓｅｃｔｃｅｌｌｓ，ｔｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓｒＡｃ－Ｃａｐｗａｓｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ，ｃｏｎｆｉｒｍｅｄｂｙＷｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔａｎｄｉｎｄｉｒｅｃｔｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅａｓｓａｙｗｉｔｈａｎｔｉｂｏｄｙａｇａｉｎｓｔＣａｐｐｒｏｔｅｉｎ．ＴｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＣａｐｐｒｏｔｅｉｎｗｉｔｈｇｏｏｄｒｅａｃｔｏｇｅｎｉｃｉｔｙｌａｉｄｔｈｅｆｏ

6、ｕｎｄａｔｉｏｎｆｏｒｆｕｒｔｈｅｒｓｔｕｄｉｅｓｏｆｔｈｅｆｕｎｃｔｉｏｎａｎｄｉｍｍｕｎｏ－ｌｏｇｉｃｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｔｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＣａｐｐｒｏｔｅｉｎ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｐｏｒｃｉｎｅｃｉｒｃｏｖｉｒｕｓｔｙｐｅ２（ＰＣＶ２）；ＯＲＦ２ｇｅｎｅ；ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｙｓｔｅｍ猪圆环病毒２型（ｐｏｒｃｉｎｅｃｉｒｃｏｖｉｒｕｓｔｙｐｅ２，生长迟缓、贫血、消瘦、呼吸困难、黄疸；还可引起感ＰＣＶ２）是近年来危害养猪业的重要病原之一，与断染猪的免疫抑制，并与多种病毒、细菌性疾病混合感［３－４］奶仔猪多系统衰竭综合征（ＰＭＷ

7、Ｓ）、猪皮炎肾病综染，给世界养猪业造成巨大的经济损失。对其致合征（ＰＤＮＳ）、猪呼吸道病以及繁殖障碍等疾病的病机理和免疫预防的研究日益成为当前的热点。［１－２］发生密切相关。现在已经使用猪圆环病毒相关ＰＣＶ２属于圆环病毒科圆环病毒属，是迄今发疾病（ＰＣＶＡＤ）这一名词来概括表示与ＰＣＶ２有关现的最小的动物病毒，直径仅为１７ｎｍ，无囊膜，其［２］的所有疾病。ＰＣＶ２感染可以造成５～１２周龄猪基因组为一条长约１．７６ｋｂ的共价闭合环状单链收稿日期：２０１０－０７－０６；修回日期：２０１０－０９－３０基金项目