小尾寒羊无角基因的分子标记和δ差异显示分析研究

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1、分类号：墨墨13：三密级：公珏单位代码：!螋墨互学号：2Q!咝曼小尾寒羊无角基因的分子标记和6差异显示分析研究StudiesOilMolecularmarkerand6DifferentialDisplayofPolledgeneinSmall·-TailHansheep学位申请人：刘媛指导教师：孙少华教授学科专业：动物遗传育种与繁殖学位类别：农学硕士授予单位：河北农业大学答辩日期：二O一三年五月三十一日独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他

2、入已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得一塑韭盛些盘茔或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：安№友签字曰期：剧另年6月2日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解塑些盔些盘堂有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权塑!鱼盘些盘堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书

3、)学位论文作者签名：办隧签字日期：≯谒弓年6月2日学位论文作者毕业后去向：工作单位：通讯地址：翩虢孑辫签字日期：知，多年莎月Z同电话：邮编：河北省自然科学基金项目资助(批准号：c2010000696)SupportedbyNaturalScienceFoundationofHebeiProvince(No．c20100006961摘要小尾寒羊作为肉裘兼用型绵羊的品种，在国内外都享有盛名，它是培育我国肉用羊品种的优秀母本。对河北小尾寒羊来说无论公、母羊均表现为无角性状。由于部分河北小尾寒羊与山东小尾寒羊进行了杂交，致使有的河北小尾寒羊表现出有角性状，

4、这给肉用无角羊的选育和生产实践带来了很多不便。因此，本文利用分子标记技术和6差异显示技术对小尾寒羊无角基因进行了相关分析研究，从而为培育优良的纯合无角品种奠定基础。利用PCR—RFLP技术研究了不同角型的三个品种绵羊((即道赛特(无角)、河北小尾寒羊(无角)、杂种蒙古羊(有角))SYNJl基因位点上一个C／T突变与角型的相关性。结果表明：在经HapII限制酶酶切后，在群体中产生了1Yr、CT及CC三种基因型，经过独立性卡方检验后，不同角型品种个体基因型频率差异达到极显著水平(P<0．01)。说明SYNJl基因361位点上的SNP与羊的无角和有角没有

5、关联性。为了进一步筛选出与小尾寒羊角型相关的新基因，利用6差异显示技术对小尾寒羊(有角)、河北小尾寒羊(无角)、河北小尾寒羊长角基及此群体中无角的小尾寒羊的羔羊的头部角生长点的皮肤组织为样本组成四个RNA池，进行差异显示研究。结果从聚丙烯酰胺凝胶检测中共筛选得到差异片段110条，经二次PCR后有80条差异片段得到了单一性扩增，再经RT-PCR剔除假阳性后，剩余63条差异片段。然后提交此63条序列至GenBank中，经BLAST分析，与NCBI数据库中序列已知的基因片段进行比对，其中有45条片段在NCBI中未发现存在高度同源序列，认定为新发现的表达片

6、段；另12条片段主要和牛、羊等的BAC中的序列有较高的相似性，其相似程度一般在80％以上，但它们的功能不详；其余6条片段分析结果为：175号片段与山羊微卫星DNOK281相似度达97％，但其功能尚不清楚；180号片段与预测的绵羊载脂蛋白B的mRNA的相似性为97％，载脂蛋白B主要是帮助细胞来识别并摄取低密度脂蛋I刍(LDL)；148号片段与预测的绵羊延伸因子1-alpha1-like的mRNA相似性为96％，延伸因子主要是在mRNA翻译时，促进多肽链延伸的；275一l号片段与人17号染色体克隆片段RPll．279810(HCIT307A16)完整序

7、列的相似性为99％，其功能也未知；195号片段与人的SYN3基因片段相似性为100％，突触蛋白是磷酸蛋白家族蛋白，它具有神经元特异性且与突触小泡相关联；50号片段与预测的绵羊的UBXdomainproteinl(UBXNl)的mRNA(327．600，翻译区)相似性达100％，与牛(395—668，翻译区)的相似性达99％，可能参与泛素．蛋白酶体通路。6差异显示研究暗示，与无角基因密切相关的片段可能在新发现的45个表达片段中，有待进一步研究分析。关键词：小尾寒羊；无角基因；SNPs：6差异显示：基因表达StudiesonMolecularmarke

8、rand6DifferentialDisplayofPolledgeneinSmall-TailedHansheepPos