小尾寒羊无角性状的DNA标记及其差异表达基因的筛选研究.pdf

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1、分类号：墨墨13：3密级：公珏单位代码：学号：10086小尾寒羊无角性状的DNA标记及其差异表达基因的筛选研究StudiesonDNAMarketingandScreeningDifferentialExpressionofPolledCharacterinSmallTailHan—sheep学位申请人：指导教师：学科专业：学位类别：授予单位：答辩日期：楚康康孙少华动物遗传育种与繁殖农学硕士河北农业大学二。一一年五月二十八日独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，

2、论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得塑兰垦盔些盘堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：糙磊乱签字日期：沙1年‘月_7日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解塑兰垦盔些盘堂．有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权塑皇垦盎些盘堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在

3、解密后适用本授权书)学位论文作者签名：撇导师签名：砑签字日期：o门f年e月]El签字日期：乃ff年6月．^学位论文作者毕业后去向：工作单位：通讯地址：电话：邮编：7日IlllIllI[mlIIIIIli．Y1897397河北省自然科学基金项目资助(批准号：C2010000696)SupportedbyNaturalScienceFoundation‘ofHebeiProvince’(No·C2010000696)。摘要培育无角羊品种在养羊生产中具有很多的优势。无角羊不易破坏围栏，在舍饲时占舍面积相对少，且也减少了角生长所需的营养，同时减少角斗伤残的损失

4、，无角羊较有角羊便于管理。在澳大利亚已培育成无角陶赛特羊优良品种，无角羊己成为羊品种的发展趋势。所以，培育无角绵羊品种对畜牧业发展具有很大的意义。本实验通过分子生物学方法寻找与绵羊角相关的基因，为今后培育无角绵羊品种提供理论依据。其研究结果如下：1、微卫星标记的研究：实验以河北小尾寒羊、无角道赛特、杂种蒙古羊三个品种不同角型的羊为样本，对微卫星位点AGLA226进行扩增检测。实验共找出8个等位基I因(A：190bp、B：166bp、C：184bp、D：160bp、E：180bp、F：156bp、G：175bp、H．-152bp)，4种基因型AB、CD、

5、EF、GH。通过SPSS软件对实验结果进行独立性卡方检验，结果表明角型与微卫星AGLA226的关联性差异不显著(P>O．05)。2、SNPs分析：本研究利用PCR—SSCP的技术，以牛SYNJl基因序列为引物，以三个牛品种(有角荷斯坦奶牛、无角安格斯、无角海福特牛)以及无角河北小尾寒羊、无角道赛特、杂种蒙古羊三个品种不同角型的羊DNA为模版，对SYNJl基因进行SSCP分析及PCR产物测序。结果表明：在SNPbSYNJI位点上未发现多态性_C3981T及与角性状相关的SNP，在牛羊物种间只存在一个C-T核苷酸差异。3、DDRT-PCR的研究：实验以有角

6、和无角绵羊各3只为样本，分别提取总RNA。根据表型组成有角RNA池和无角RNA池。反转录后两角型的cDNA进行DDRT-PCR分析，共筛选出30条差异片段，经过二次扩增、克隆测序等方法剔除假阳性后，剩余7条差异片段。以该7条片段的测序结果设计引物，再以原RNA反转录的cDNA为模板进行扩增再进一步剔除假阳性片段，最后剩余一条差异片段S,-16。。经生物信息学分析，在GenBank里分析发现该片段序列与绵羊的keratin83(角蛋白83)的mRNA序列(1687—1842bp，非翻译区)具有100％的同源性，与牛的keratin83的mRNA序列(16

7、90—1835bp，非翻译区)有93％的同源性；对keratin83的氨基酸序列进行分析，keratin83可能通过产生异质二聚体进而形成稳定的有活性的四聚体，以及其本身的卷曲螺旋结构对角的有无起到调控作用。该基因可能是无角基因的上游调控基因，其机制有待进一步深入研究。关键词：小尾寒羊；无角基因；PCR-SSCP；DDRT-PCR；基因差异表达StudyonDNAMarkeringandScreeningDifferentialExpressionofPolledCharacterinSmallTailHan．sheepPostgraduate：Chu

8、KangkangMajor：AnimalGeneticandBreedingDirection