细胞自噬在表柔比星诱导膀胱肿瘤t24细胞凋亡中的作用及机制研究

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1、论文题目：细胞自噬在表柔比星诱导膀胱肿瘤T24．细胞凋亡中的作用及机制研究答辩委员会成员：墓丝良麴撞逝江盍．堂医堂瞳隘属筻=医院金盍竖数撞遏型医鲎随咝扈簋二医随夏鹛塾撞温划医堂随隧扈箜=医随温州医学院硕士学位论文目录一、外文缩略词中英文参照表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯04二、中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯05三、英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯07四、前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯09五、正文1．材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯112．

2、结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯223．分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯284．参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯31六、附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯34七、致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯35八、综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯36九、独创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯43温州医学院硕士学位论文英文缩写pBSFBSDMSOPCR叩mTBSddH20TrisP13KLC3M1TrFC

3、MP70s6kpIAKTPVDFBSAmTOREPIPE3．MAFrrC外文缩略词中英文参照表英文全称phosphatebufferedsalineFetalBovineSerumDimethylsulfoxidepolymerasechainreactionrotationperminuteTrisbuffersalinedeionizedwatertris(hydroxymethyl)aminomethanephosphatidylinositol3-kinaseMicrotubule—associatedprotein1l

4、ightchain3thiazolylbluetetrazoliumbromideflowcytometryribosomalproteinS6kinasePropidiumIodideProteinKinaseBPolyvinylideneFluorideA1buminfrombovineserumMammalianTargetOfRapamycinepirubicinphosphafidylethanolamine3-methyladeninefluoresceinisothiocyanate4中文全称磷酸盐缓冲液胎牛血清二

5、甲基亚砜聚合酶链反应每分钟转速Tris缓冲液去离子水三羟甲基氨基甲烷磷脂酰肌醇3一激酶微管相关蛋白l轻链3四甲基偶氮唑盐比色法流式细胞术核糖体蛋白S6激酶碘化丙啶蛋白激酶B聚偏二氟乙烯膜牛血清白蛋白雷帕霉素靶蛋白表柔比星磷脂酰乙醇胺3．甲基腺嘌呤异硫氰酸荧光素温州医学院硕士学位论文细胞自噬在表柔比星诱导膀胱肿瘤T24细胞凋亡中的作用及机制研究中文摘要目的：1．观察膀胱肿瘤T24细胞在EPI作用下自噬相关基因Beclin一1和LC3(I、II)表达情况，以及自噬相关通路mTOR中pAKT、AKI"、p70s6k蛋白表达，并讨论EP

6、I作用后肿瘤细胞自噬的可能机制。2．调节膀胱肿瘤T24细胞自噬表达水平，观察缅胞对于EPI治疗敏感性的变化以及自噬相关基因Beclin一1和LC3mRNA和蛋白表达情况，并讨论自噬在膀胱肿瘤化疗中的作用。方法：1．不同浓度化疗药物EPI作用于膀胱肿瘤T24细胞24h，MTT检测药物对膀胱肿瘤细胞增殖抑制率的影响，Westernblot检测Beclin．1、LC3(I、II)、pAKT、．ANT、pT0s6k等蛋白表达，RT-PCR检测LC3、Beclin一1的mRNA转录情况水平。免疫荧光检测LC3(I、II)蛋白表达。2．用M

7、TT筛选出EPI处理浓度，EPI浓度为lmg·L-1'3．MA浓度为10mmol-L～。将实验分为正常对照组、EPI组、EPI联合自噬抑制剂3-MA组，及单用3-MA组，药物处理膀胱肿瘤T24细胞24h后，MTT和流式细胞术分别检测药物对细胞增殖抑制率和细胞凋亡率的影响，免疫荧光检测LC3(1、II)表达，RT-PCR及Westernblot检测Beclin．1和LC3mRNA和蛋白的表达。结果：1，不同浓度EPI作用于T24细胞24h后，可明显抑制细胞增殖，并呈浓度依赖性。Westernblot检测显示，膀胱肿瘤细胞经EPI处

8、理后，自噬相关基因LC3(I、1I)、Beclin—l表达增强，随EPI药物浓度的增加而表达增加。免疫荧光和RT-PCR检测自噬相关基因LC3(I、II)、Beclin．1表达结果与Westernblot检测结果相似。而Westernblot检测显示，自噬上游r