环氧合酶2信号对犬乳腺肿瘤干细胞增殖和抗凋亡的调控作用研究

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1、分类号：单位代码：密级号博士学位论文环氧合酶信号对犬乳腺肿瘤干细胞增殖和抗凋亡的调控作用研究研究生：黄坚指导教师：林德贵教授合作指导教师：串请学位类别：农学博士专业领域名称：临床兽医学研究方向：兽医外科学及外科手术学所在学院：动物医学院年月Ph.DDissertationTheEffectsofCyclooxygenase-2SignalonRegulatingtheProliferativeandAnti-apoptoticCapabilitiesofCanineMammaryTumorInitiatingCellsPh.DCandidate:HuangJianSu

2、pervisor:Prof.LinDeguiMajor:ClinicalVeterinaryMedicineCollegeofVeterinaryMedicineChinaAgriculturalUniversityBeijing,100193,P.R.ChinaMay,2015独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中已经注明引用和致谢的内容外，论文中不包含本人和其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中国农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均

3、已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：时间：，广年尸月；；曰关于学位论文使用授权的说明本人完全了解中国农业大学有关保留、使用学位论文的规定。本人同意中国农业大学有权保存及向国家有关部门和机构送交论文的纸质版和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人同意中国农业大学将本学位论文的全部或部分内容授权汇编录入《中国博士学位论文全文数据库》或《中国优秀硕士学位论文全文数据库》进行出版，并孚受相关权益。保密的学位论文在解密后应遵守此协议）学位论文作者签名：时间：如、年厂月日摘要研究目的：环氧合酶及其限速产物前列腺素在犬乳腺肿瘤的发生发展过程中表现出多重生物学功能，该

4、信号通路的异常激活可促进肿瘤细胞的增殖、抗凋亡能力以及增加肿瘤复发的风险。为了阐明信号通路对犬肿瘤干细胞生物学性能的维持及调控作用，本试验将从组织和细胞水平对这上述现象和潜在机理进行探讨：研究方法：通过免疫组化化学分析方法，检测与肿瘤干细胞相关标记、、和在正常乳腺组织以及原发性肿瘤组织中的表达分布和相关性，并从肿瘤组织中分离肿瘤单细胞建立无血清悬浮培养的肿瘤干细胞微乳球模型，进一步分析上述标记的表达类型间的关联性。以和两株犬乳腺肿瘤细胞建立富集肿瘤干细胞的微乳球模型，和分析信号通路、信号通路相关因子以及干细胞相关标记因子的表达差异，确定异常激活因子。考察悬浮培养细胞以

5、及表型细胞的比例变化，以及细胞的增殖、侵袭和体内成瘤能力的变化。确定对肿瘤千细胞富集及肿瘤发生的作用。通过干扰和抑制剂（塞来昔布）靶向抑制细胞中的表达，同时分析其对肿瘤干细胞特征的影响。最后，将微乳球细胞接种免疫缺陷小鼠建立体内肿瘤模型单一使用塞来昔布或者联合化疗药物顺铂观察其对肿瘤的治疗作用。研究结果：在正常乳腺、癌前增生以及肿瘤组织中的表达存在明显的差异，可作为早期组织向肿瘤转变的提示因子，其异质性的表达类型也反映了肿瘤组织细胞层次性。在原发性乳腺肿瘤组织中的表达与和具有显茗的相关性。在微乳球中，的表达升高与肿瘤的恶性程度相关，并伴随和的表达上调，进一步提示了在维

6、持肿瘤干细胞亚群的数量及其性能方面有潜在作叫。基因差异表达分析的结果显示，、、、、、、、表达存在明显差异，说明了肿瘤干细胞的富集过程伴随和信号通路的异常激活。而对微乳球进行细胞表型和细胞亚群的分析结果也显示，微乳球成功富集了乳腺肿瘤干细胞，相对于贴壁细胞显示出更强的增殖、迁移、佼袭能力以及在体内形成肿瘤的能力。干扰或者选择性抑制剂可成功降低肿瘤细胞中的表达水平，并有效减少肿瘤细胞中、细胞亚群的比例以及抑制肿瘤细胞的恶性行为，而这些作可被逆转。抑制的表达可下调和的蛋白水平，同时上调的表达，联合顺铂可有效破坏微乳球的形成，增加凋亡细胞的比例。与单独分别给药相比，口服塞来昔

7、布（，次日）联合腹腔注射顺铂（次日）可有效抑制小鼠异位移植肿瘤的生长，减少肿瘤纟织中肿瘤干细胞的数目。结论：综合试验的所有数据，表明肿瘤千细胞的生物宁性能只有重要的调控作而这一作川方式可能是通过信号通路来实现的。靶向抑制环氧合酶信号通路对犬乳腺肿瘤干细胞的抑制作用为临床的肿瘤治疗提供了新的依据。关键词：犬乳腺肿瘤，肿瘤干细胞，，AbstractIntroduction:Cyclooxygense-2andprostaglanding(COX-2/PGE2)playmultiplebiologicalfunctionsonCTMsprogression