plcr在炭疽芽胞杆菌中的研究

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1、学校代码：学号：分类号：密级：去大營硕士学位论文题目：在炭疽芽胞杆菌中的研究作者：贾晓琳指导教师：郑继平教授王恒樑研究员刘先凯副研究员专业：遗传学时间：二〇一五年五月ThefunctionofPlcRinBacillusanthracisAThesisSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementFortheMasterDegreeincollegeofagriculturalByJiaXiao-linSupervisor:Major:GeneticsSubmittedtime:May，海南

2、大学学位论文原创性声明和使用授权说明原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品或成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律结果由本人承担。论文作者签名：曰期片年分月巧曰学位论文版权使用授权说明本人完全了解海南大学关于收集、保存、使用学位论文的规定，卩：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。学校可以为存在馆际合作关系兄弟高校用

3、户提供文献传递服务和交换服务。本人授权海南大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以釆用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密论文在解密后遵守此规定。论文作者签名日期年女月平本人已经认真阅读“髙校学位论文全文数据库发布章程”，同意将本人的学位论文提交“高校学位论文全文数据库”中全文发布，可按“章程”中规定享受相关权益。同意论文提交后滞后：口半年：口一年：二年发布。论文作者签名：导师签名月巧曰日期：年了月摘要是蜡样芽胞杆菌和苏云金芽胞杆菌中十分重要的多效调控因子，多种毒力因子编码基因的表达都由它激活，

4、例如磷脂酶、蛋白酶和溶血素等。改变基因的序列可使蜡样芽胞杆菌与苏云金芽胞杆菌中的溶血素和细胞毒素的表达与活性减弱。比较基因组学显示，炭疸芽胞杆菌中的基因序列是与蜡样芽胞杆菌和苏云金芽胞杆菌同源的，但基因在炭疽芽胞杆菌当中发生了一个无义突变，导致在炭疽芽胞杆菌中不能够正常表达。为了研宄基因对炭疽芽胞杆菌功能的影响，本研究主要以蜡样芽胞杆菌基因组为模板构建了、、、、、、办十个菌株对其进行表型分析，对其中的、、、、进行了蛋白质组学研宄，并单独对、及及中的加、、三个基因在转录水平上进行了研究。结果显示，单独将和全基因序列导入炭疽芽胞杆菌后重组

5、菌株、、、与重组菌株、—样其溶血活性及卵磷脂酶活性均没有恢复。重组菌株、的溶血活性没有恢复，恢复了部分卵磷脂酶活性，而、重组菌株的溶血酶活性及卵磷脂酶活性均恢复。表明将蜡样芽胞杆菌的单独基因导入炭疽芽胞杆菌后，可以直接激活部分卵磷脂酶活性，但不能激活溶血酶活性；将融合基因导入炭疽芽胞杆菌后，溶血酶及卵磷脂酶活性均恢复，但重组菌株的溶血活性没有叫稳定。蛋白的表达受自身所调控，其较为保守的端，属于结合区域，在调控基因的启动子区域存在高度保守的回文序列，我们推测他可能构成了；的识别位点（即根据该回文序列我们查找出个可能受调控的蛋白，通过对、

6、、￥蛋白质组学的研宄，在我们查找的差异蛋白中有个蛋白是受调控的。在转录水平上分析了和、等与溶血素、卵憐脂酶相关的基因，、基因的相对表达量与溶血活性及卵磷脂酶活性呈正相关，他基因的相对表达量与芽胞形成率呈负相关，虽然单独导入和均不影响芽胞的形成，但影响的芽胞形成率，在重组菌株与中其芽胞形成率均降低。关键词：’炭疽芽胞杆菌；蜡样芽胞杆菌；卵磷脂酶；溶血素AbstractPlcR(PhospholipaseCRegulator)isaveryimportantpleiotropicregulatorpresentinBacilluscere

7、usandB.thuringiensis.Itcanactivatetheexpressionofmanygenesencodingvirulencefactors，，￥、，、、、，、￥，，录摘恶马言第一章外源基因在炭疽芽胞杆菌中的表达“材料与方法实验仪器设备与主要试剂实验所用主要仪器表本实验中所用到的试剂菌株及质粒培养基及相关试剂配制培养基及抗生素的配制所用试剂的配制菌株构建引物设计、合成及测序感受态的制备质粒无化转入去甲基化质粒电转入蛋白在大肠杆菌中表达、纯化及抗多克隆抗体制备分析确认在炭疽芽胞杆菌中表达表型分析生长曲线测定芽胞形

8、成率分析溶血现象观察卵磷脂酶活性验证结果和分析在炭疽芽胞杆菌的表达重组表达菌株构建蛋白在大肠杆菌中的表达、纯化及抗多克隆抗体制备分析确认在炭疽芽胞杆菌中中表达表型分析生长曲线溶血验证卵磷脂酶活性验证芽胞形成第二章融合蛋白