‘惠’苹果自交后代叶片离体高效再生体系和遗传转化研究

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1、密级：论文编号:中囯农业科学院学位论文‘惠’苹果自交后代叶片离体高效再生体系和遗传转化研究StudyoninvitroEfficientRegenerationSystemandGeneticTransformationofAppleSelf-crossedProgenyfrom‘Megumi申指申专研培请人师别业向位•郝红梅•••••••导学丛佩华研究员请农学硕士果树学究养方单果树遗传育种_■中国农业科学院果树研究所中国农业科学院研究生院提交日期2015年6月独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导F进行的研究丄作及取得的研究成果。尽我所知，除/文屮特別加以标注

2、和致谢的地方外，论文屮不包含其他人己经发表或撰写过的研宂成果，也小包含为获得中国农业科学院或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我-MX作的N志对本研究所做的任何页献均已在论文中作了明确的说明并表不了谢意。研究生签名:希釭悔时N:%/j：年I月烈曰关于论文使用授权的声明本人完全/解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定，即：中国农业科学院有权保留送交论文的S印件和磁盘，允许论文被杳阅和借阅，吋以采用影印、缩印或彳」描等复制段保存、汇编学位论文。问意屮国农业科学院可以用+同方式在不N媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。研宄生签名:婦红袼时间：如/r年r月站円

3、导师签名I:时间：年了月丨丨中国农业科学院研究生院同等学力申请硕上学位论文评阅人、答辩委员会名单表论文题1J‘惠粜自交实生茁叶片离体高效再生体系和遗传转化研究论文作者郝旁1:梅专业束树学研究方向果树遗传育种指导教师丛佩平培养单位（研究所、中心)罘树研究所硕（,）职称中-位专业签名技师硕异门评M-导口硕和阅博导口人硕导口關口符硕賊屮U农业科学院刘凤之研究员果树学土博导口果树研究所L席硕和教授大津科技人学食品科学.WVfb/硕导口李天忠教授屮a农业大学采树学答硕卿屮国农业科学院研究员果树学辩博和果树研究所%H硕和中w农业科学院研究员果树学博异果树研究所於//V硕导口

4、博导口硕导口博和会议丨己泌（秘丨'5)fj.1论文答辩时N地点Secrecy:No.ChineseAcademyofAgriculturalSciencesMasterDissertationStudyoninvitroEfficientRegenerationSystemandGeneticTransformationofAppleSelf-crossedProgenyfrom‘Megumi’Ms.Candidate：HaoHongmeiAdvisor：Prof.CongPeihuaMajor：PomologySpecialty：FruitTreeGeneticsand

5、BreedingJune，2015摘要为了筛选苹果离体叶片再生效率较高的基因型，为苹果转基因研究提供转化受体新材料，本研究以‘惠’自交F1代和‘华富’ב皇家嘎拉’、‘寒富’ב元帅80-3’、‘元帅80-3’ב寒富’杂交F1代实生苗为试材，采用茎段培养获得试管苗，筛选出增殖能力最强的单株‘惠’自交后代Meg-5，进一步对影响其离体叶片再生不定芽的主要因素进行研究，建立了高效离体叶片再生体系，并在此基础上，初步建立了根癌农杆菌介导的Meg-5遗传转化体系。主要研究内容和结果如下：1.不同杂交组合后代试管苗增殖能力不同杂交后代的试管苗增殖能力差异明显，‘华富’ב皇家嘎拉

6、’杂交后代试管苗增殖能力较强，其中最强的单株为09-294，增殖系数为3.06；‘寒富’ב元帅80-3’、‘元帅80-3’ב寒富’2个杂交组合后代试管苗增殖能力均较差，增殖系数在1.03~1.56。2.Meg-5试管苗离体叶片高效再生体系研究了激素浓度、暗培养时间、叶片部位、叶片放置方式、试管苗苗龄等对Meg-5试管苗离体叶片再生的影响。结果表明：适宜的再生培养基配方为MS+2.0mg/LTDZ+0.5mg/LNAA+30g/L蔗糖+2.6g/L胶立得（Gelzan）；最佳暗培养时间为14~21d；从叶尖部到叶柄部再生效率逐渐升高，叶背向下接种优于叶背向上；最适试管苗

7、苗龄为20~30d。在此条件下，Meg-5试管苗离体叶片不定芽再生频率可达到100%，单片叶平均再生芽数可达到31.59个。当不定芽长至3cm以上时，将其转至生根培养基1/2MS+0.3mg/LIBA+0.2mg/LIAA+30g/L蔗糖+6.5g/L琼脂上，生根率可达100%，平均生根条数7.26条，平均根长3.9cm。幼苗移栽成活率100%，获得完整植株。3.根癌农杆菌介导的Meg-5遗传转化体系在建立Meg-5试管苗离体叶片高效再生体系的基础上，研究了抗生素浓度、农杆菌菌液浓度、预培养时间、菌液侵染时间、共培养时间、推迟