白木香茉莉酸类物质合成途径关键酶aos1基因的克隆与表达研究

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1、学校代码：学号：分类号：密级：洛大營硕士学位论文题目：白木香茉莉酸类物质合成途径关键酶某因的克隆与表达研究作者：张指导老师：王健教授专业：南药学时间：CloningandExpressionofJasmonicAcidBiosynthesisKeyEnzymeAOS1GeneinAquilariasinensisAThesisSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementFortheMasterDegreeinAgriculturalScienceByZh

2、angKeSupervisor:T'0AMajor:TraditionalSouthChineseMedicineSubmittedtime:May,2015海南大学学位论文原创性声明和使用授权说明原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品或成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本声明的法律结果由本人承担。论文作者签名：曰期）丄年夕月对曰学

3、位论文版权使用授权说明本人完全了解海南大学关于收集、保存、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权海南大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本人在导师指导下完成的论文成果，知识产权妇属海南大学。保密论文在解密后遵守此规定》论文作者签名：例日期：年乡月站日曰期丨上年夂月：：日本人已经认真阅读“高校学位论文全文数据库发布章程”，同意将本人的学位论文提交“

4、高校学位论文全文数据库”中全文发布，并可按“章程”中规定享受相关权益。同意论文提交后滞后：⑩年：口一年：口二年发布。论文作者签名：豕列日期：如①年夕月对日日期年女月日摘要白木香（为瑞香科沉香属植物，是我国国产沉香唯一植物资源，具有极高的药用价值和经济价值。茉莉酸及其衍生物作为植物伤害信号分子影响植物次生代谢途径中许多关键酶基因的协调表达，并可以作为外源诱导子对植物次生代谢物进行调控，可诱导沉香特征性成分的生成。丙二烯氧化物合成酶是茉莉酸生物合成途径关键酶之一，但有关茉莉酸类物质合成途径基因的功能和基

5、因的诱导表达还不十分明确。深入探索茉莉酸生物合成途径与植物次生代谢产物的关系，以达到利用基因工程调控沉香特征性成分的产生，将具有十分重要的理论和实际应用价值。本研究以白木香为实验材料，利用分析法萃取的茉莉酸甲酯处理后的白木香愈伤组织的挥发性成分；并从白木香中克隆了合成途径关键酶基因利用研究其表达特性，构建了植物表达载体，转化模式植物拟南芥，为进一步研宄白木香茉莉酸生物合成途径与沉香形成的分子机制奠定了基础。主要结果如下：利用正交实验法优化萃取白木香愈伤组织挥发性物质的条件并对其萃取物进行分析。正交实

6、验分析结果表明，最佳萃取条件是当不破碎愈伤组织材料，于°条件下、釆用捕集时效果最佳。分析结果表明，诱导的白木香愈伤组织产生了愈创木燃、潷草煤、榄香燃和愈创木烯种倍半萜。通过获得了白木香的基因全长，并对其基因序列进行生物信息学分析，结果表明其与其它物种均有较高的同源性。并利用软件对其性质进行分析预测，发现其含有一个叶绿体转运肽，属于细胞色素大家族。通过白木香内参基因的保守序列，设计特异性引物，利用技术扩增其’端和’端基因片段，经过软件拼接，获得的全长。对其进行生物信息学分析，结果验证了基因序列的正确性

7、及高度保守性，可作为的内参基因。通过对白木香茉莉酸生物合成途径关键酶基因、倍半萜生物合成途径关键酶基因、、及的表达情况进行分析。实验结果表明，、、、及基因在不同组织中均有表达，在MeJA诱导下表达量均出现上调。其中，和基因在新叶中表达量最高；和基因在根中表达量最高；基因在茎中表达量最高，茎中的表达量为根的倍。输液法诱导条件下，基因的表达水平在相对表达量达到最高；喷雾法诱导处理下，基因的表达水平在相对表达量达到最高，之后趋于稳定。喷雾法诱导处理对基因和基因的促进作用有显著性差异；和基因表达量变化差异不

8、明显。和的相对表达量在诱导时达到最大，分别为对照的倍和倍。构建了植物表达载体，通过农杆菌介导，采用喷雾法转化拟南芥，经过除草剂筛选乃代，获得转基因拟南芥幼苗。通过检测，初步筛选出转基因拟南芥。为进一步研宄丙二烯氧化酶转基因植株奠定实验基础。关键词：白木香；丙二烯氧化物合成酶；茉莉酸甲酯诱导；基因表达；植物表达载体AbstractAquilariasinensis(Lour.)Gilgisdomesticanduniquenativemedicalplantresour