草鱼脂肪肝相关基因和mirnas的差异表达及mir-33的靶基因验证

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1、单位代码10476学号1204180306分类号Q17紆看許祐夫f硕士学位论文草鱼脂肪肝相关基因和miRNAs的差异表达及miR-33的靶基因验证学科、专业水生生物学研究方向水产动物营养与饲料科学申请学位类别理学硕士申请人孙君君聂国兴教授指导教师卢荣华副教授二O—五年六月独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含为获得河南师范大学或其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了

2、谢意。签名：________曰期：如/T-你-关于论文使用授权的说明本人完全了解河南师范大学有关保留、使用学位论文的规定，即：有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权河南师范大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）作者签名：^^,-M导师签名日期:^oiX~〇L-°JDIFFERENTIALEXPRESSIONOFLIVERSTEATOSIS-RELATEDGENESANDMIRNASINLIVERANDVERIFIEDTARGETGEN

3、ESOFMIR-33FROMCTENOPHARYNGODONIDELLAADissertationSubmittedtotheGraduateSchoolofHenanNormalUniversityinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofScienceBySunJunJunSupervisor:Prof.NieGuoxingJune2015摘要集约化水产养殖模式下，养殖鱼类常出现肝脂质代谢紊乱等问题，作为世界上养殖产量较大的淡水鱼类，草鱼（Ctenopharyngodonidella）养殖普遍采用投喂配合饲料的

4、精养模式，其营养需要及配方技术的研究虽已深入开展，但生产中仍经常出现与饲料有关的糖脂代谢失调及肝脂质代谢紊乱问题，已严重影响到草鱼品质。本研究以高糖高脂饲料诱导的草鱼脂肪肝为材料，通过高通量测序技术，筛选出差异表达的miRNAs；利用miRNAs预测软件，预测鱼类脂代谢特异miRNAs的靶基因；利用qRT-PCR技术检测草鱼脂代谢相关基因SREBP-1、PPARγ、ACC1、FAS、LPL、CPT-1的表达变化，并对筛选出的脂代谢相关miR-33的靶基因进行初步验证，以期阐明关键miRNAs调节草鱼肝脂代谢紊乱的作用机制。本研究从筛选调节肝脂代谢的关键miRNAs入手，探讨鱼类肝脏脂肪代谢

5、的标志基因和miRNAs的差异变化，旨在丰富鱼类糖脂代谢理论，为提高草鱼脂代谢利用能力、防治脂肪肝等营养代谢疾病、促进草鱼健康养殖提供新的思路。1、高糖高脂饲料诱导草鱼脂肪肝形成为探讨投喂高糖高脂饲料对草鱼肝脏脂肪蓄积的影响，本研究设计了4种等氮但糖脂含量水平不等的饲料，对照组（糖含量31%，脂肪含量4%）、高脂组（糖含量31%，脂肪含量8%）、高糖组（糖含量45%，脂肪含量4%）和高糖高脂组（糖含量45%，脂肪含量8%），用试验饲料饲喂草鱼65天后，检测草鱼生长指标、饲料效率、蛋白质效率及肝脂含量，对草鱼是否形成脂肪肝进行初步判断。结果表明，草鱼在摄食高糖高脂饲料后，其生长性能、饲料效率

6、、蛋白质效率与对照组相比无显著差异（P>0.05）；草鱼的肝体比（HSI）、脏体比（VSI）与对照组相比也无显著变化（P>0.05）；高糖高脂组的肠脂比（MFI）显著高于对照组（P<0.05），高糖组、高脂组与对照组之间无显著差异（P>0.05）；高糖组、高脂组和高糖高脂组的肝脂含量均显著高于对照组（P<0.05），说明高糖高脂饲料对草鱼生长影响不大，但引起了草鱼肝脏脂肪的大量蓄积。用全自动生化分析仪（AU-640,OLYMPUS）检测血清中甘油三酯（Triglyceride,TG）、谷丙转氨酶（Alanineaminotransferase,ALT）、谷草转氨酶（Aspartateami

7、notransferase,AST）、球蛋白（Globulin,GLB）、总蛋白（Totalprotein,TP）等生化指标，结果发现在高糖高脂饲料诱导下，与对照组相比，AST/ALT、GLB、TP、TG等指标升高，说明肝脏功能已受到了一定影响，其中以高糖高脂组受到的损害最严重。I显微镜下观察肝脏组织学形态，结果发现，与对照组相比，高糖组、高脂组和高糖高脂组的肝细胞内脂滴明显增多，有的细胞肿大变形，说明高糖高脂诱导不仅导