绒山羊骨骼肌mirnas及其靶基因表达谱分析

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1、分类号S813.3学校代码10129UDC636学号2010201002内蒙古牧区小城镇可持续发展模式研究ThestudyonsustainabledevelopmentmodeofsmalldowntownintheInnerMongoliapastoralarea.---ForShangdouTownofZhenglanBannerasexample申请人：绒山羊骨骼肌miRNAs及其靶基因表达谱分析TheAnalysisofMiRNAsandTheirTargetExpressiongProfilesinCashm

2、ereGoatSkeletalMuscle申请人：韩志玲学科门类：农学学科专业：动物遗传育种与繁殖研究方向：绒山羊遗传育种指导教师：李金泉教授论文提交日期：二〇一三年六月摘要内蒙古绒山羊是内蒙地区的特色家畜品种，除了其优良的产绒性能，山羊肉也具有较高的营养价值，但目前对其肉质基因调控方面的研究较少。本研究以肌肉相关基因miR-1、miR-133、miR-24和脂肪相关基因miR-103、miR-122、miR-143及广泛表达的基因let7为研究对象，通过SYBR荧光定量PCR对各miRNA在绒山羊骨骼肌中的表达进行分析

3、，并利用MTFP技术初步筛选各miRNA所调控的靶基因，之后建立绒山羊骨骼肌细胞系，选取miR-133构建表达载体并进行细胞转染试验，得到如下结果：1、研究所选取的7个miRNA在绒山羊骨骼肌中的表达量依次为：miR-1>miR-133>miR-24>let7>miR-143>miR-103>miR-122，其中miR-1和miR-133的表达规律相似，且肌肉相关miRNA比脂肪相关miRNA的表达量高，此外多数miRNA在成年公羊背最长肌中表达量最高，在成年母羊背最长肌中有最低表达量；2、利用MTFP技术批量筛选到98

4、个靶基因，各miRNA具有各自的MTFP谱征，且不同miRNA在背最长肌和后腿肌中的靶基因表达量差别较小，通过测序所得到的SYNM、ALDOA、TLK2等靶基因候选基因参与细胞分裂、能量传递、信号转导等过程；3、建立了绒山羊骨骼肌细胞系，为后续细胞验证实验提供物质基础；4、对miR-133构建的pre-miR-133表达载体通过转染成功进入细胞，但在加工成成熟miR-133的过程中出现问题，未能实现miR-133在骨骼肌细胞中的过表达。关键词：绒山羊；miRNAs；靶基因；细胞培养；表达载体；转染TheAnalysiso

5、fMiRNAsandTheirTargetExpressiongProfilesinCashmereGoatSkeletalMuscleAbstractInnerMongoliacashmeregoatsarethecharacteristiclivestockbreedsinInnerMongoliaregion,inaditiontoitsexcellentcashmereproductionperformance,goatmeathasahighnutritionalvalue,buttherearelessstu

6、diesonitssucculentgeneregulationcurrently.Inthisstudy,musclerelatedgenesmiR-1、miR-133、miR-24,fatrelatedgenesmiR-103、miR-122、miR-143andwidelyexpressedgenelet7wereselectedasthereaserchobjects,SYBRquantitativePCRwasusedtoanalyzedeachmiRNAexpressioninskeletalmuscleof

7、cashmeregoat,andmiRNA-mediatedtargetgeneswereinitialscreenedbyMTFPtechnology,thencashmeregoatskeletalmusclecelllineswasestablished,miR-133wasselectedtoconstructedexpressionvectorandcelltransfectionexperimentswascarried,resultswereasfollows:1.ThesevenmiRNAs’expres

8、sionlevelsinskeletalmuscleofcashmeregoatwereasfollows:miR-1>miR-133>miR-24>let7>miR-143>miR-103>miR-122,theexpressionpattertofmiR-1andmiR-133weresimilar,andthe