蝉花多糖提取工艺优化及活性研究

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1、分类号：Ｑ９３５１单位代码：１的６４密级：学号：１２７２０４３６各傲店赴丈葦学位论义蜂花多糖提取工艺优化及活性硏究ＳｔｕｄｙｏｎｔｈｅｏｔｉｍａｌｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｒｏｃｅｓｓａｎｄｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｏｆｐｐｙＣｏｒｄｙｃｅｐｓｃｉｃａｄａｅｏｌｓａｃｃｈａｒｉｄｅｐｙ研究生：史世晨指导教师：汪维云教授合作指导教师：申请学位口类级别：理学硕±专业名称；生物化学与分子生物学研究方向；半物制药所在学院；

2、生命科学学院答辩委员会主席；２０１５年６月独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加Ｗ标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得安徽农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料一。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。办也ｉ＂研究生签名；：年＾月＾曰时间２＂＾）《３关于论文使用授权的说明本人完全了解安徽农业大学有关保鹽、使用学位论文的规

3、定，目Ｐ；学校有权保留送交论文的复印件和磁盘、印，允许论文被查阅和借，可Ｗ采用影印缩或扫描等复阅制手段保存、汇编学位论文。同意安徽农业大学可用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或。部分内容俯密的学位论文在解密后应进守此祗议）：：研生签名触曰究时间０月＞＾來＾一＾签：：第名年导师时间月ｊ中文摘要蝉花是一种应用已久的药用真菌，医书古籍中的收录远早于冬虫夏草。蝉花中主要的药用活性成分有以下几种：虫草酸、虫草多糖、生物碱、虫草素、腺苷等。然而野生蝉花较为罕见，这局限了蝉花的大规模应用。本文主要

4、研究蝉花菌丝的液体发酵条件的优化、蝉花菌丝中各种药用成分的分析、蝉花多糖提取条件的方案改良、蝉花多糖对各种细菌和真菌的抑制作用。主要研究结果如下：（1）依据单因素实验，研究蝉花菌丝在液体发酵中碳源、氮源、无机盐和装液量，并确定蝉花菌丝液体发酵的最佳条件为：蔗糖3%,酵母提取物1%,磷酸二氢钾0.15%，硫酸镁0.07%，装液量100mL/250mL。该工艺通过摇瓶验证和发酵罐反应器放大进行验证，结果可靠。（2）综合单因素实验、正交优化实验以及响应面优化设计的结果，研究人工发酵培养所得的蝉花菌丝中提取粗多糖的料液比、预浸泡时间、超声

5、时间和水提时间，最终拟定蝉花粗多糖提取的最佳条件为：料液比1:22，预浸泡6h，超声时间43min，水提时间2.2h。（3）纯化后的多糖以苯酚-硫酸法进行测定，最终含量约为2.11%；高效液相色谱法对蝉花提取物进行测定，其中腺苷含量约为0.171%，未检出虫草素。（4）蝉花多糖不能抑制黑霉菌的生长，而对于几种常见菌，抑制大肠杆菌和金黄色葡萄球菌生长的效果较为明显，MIC值都为10mg/mL。（5）扫描电镜观察蝉花多糖使细菌表面产生坑洞和破损，并且损毁程度与蝉花多糖的浓度呈正相关，结果表明蝉花多糖对细菌的细胞结构有破坏作用。（6）提

6、取蝉花多糖处理后的细菌基因组DNA，进行琼脂糖凝胶电泳，随着蝉花多糖浓度的提高，电泳后的DNA条带越来越浅，但带型完整且没有出现弥散状，这表明蝉花多糖并不能使细菌基因组DNA降解，因此蝉花多糖抑菌作用的机理可能还是因为其对细菌细胞结构的破坏效果。关键词：蝉花、蝉花多糖、腺苷、抑菌机理IAbstractCordycepscicadaewasusedaschinesetraditionalmedcineforalongtimeanditwasrecorded800yearsearlierthanCordycepssinensis.Av

7、arietyofmedicinalingredientssuchasMannitol,Polysaccharide,Aminoacid,Cordycepin,AdenosinewasincludedinCordycepscicadae.However,theresourceofferalCordycepscicadaeisveryrarewhichlimitetheextensiveuseofit.ThispapermainlyfoucsontheoptimizationofCordycepscicadaefermentation

8、conditions,theanalysisofvariousmedicinalingredientsinCordycepscicadae,theoptimizationofextractionconditionsofCordycepscicada