枸杞子多糖提取工艺优化及体外抗氧化活性研究

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1、枸杞子多糖提取工艺优化及体外抗氧化活性研究作者：刘长建姜波刘亮范圣第【摘要】目的研究枸杞子多糖的提取及抗氧化活性。方法采用水提法提取枸杞子中的多糖，通过正交实验研究了固液比、提取温度、提取时间对枸杞子多糖提取得率的影响，并进行了提取次数实验。采用羟基自由基、超氧阴离子自由基体系，对枸杞子多糖的抗氧化活性进行了研究，并与维生素C进行了比较。结果确立了水提法提取枸杞子多糖的最佳工艺条件为提取温度80℃，固液比1∶30，提取时间3.5h，提取2次。当多糖浓度达到229.5μg/ml时，清除率达到48.1%，维生素C的清除率为41.2%。对超氧阴离子自

2、由基的清除率低于维生素C，当多糖浓度达到229.5μg/ml时，清除率达到13.5%，维生素C的清除率为48.6%。结论该方法简单、环保，枸杞子中多糖含量为8.34%。枸杞子多糖对这两种自由基均有不同的抑制作用。对羟基自由基的清除率高于维生素C。【关键词】枸杞子多糖提取正交实验抗氧化活性枸杞子为茄科（Solanaceae）植物枸杞LyciumchinenseMill的成熟果实，是我国传统的滋补中药材。《本草纲目》中记载枸杞子具有坚筋骨、补精气诸不足、明目安神、令人长寿等功效［1］。近年来的研究发现，植物多糖具有抗肿瘤、增强机体免疫力等功效，已是

3、当前国内外研究的热点［2～5］。目前人们对枸杞子多糖进行了较广泛的研究，发现枸杞多糖具有增强机体免疫力、抗肿瘤、抗衰老、降血脂、降血糖、抗疲劳、护肝、防辐射、抗缺氧等功效［6～8］，同时对多糖的分离与纯化进行了一些研究［9，10］，但对提取的工艺条件研究较少。本文对影响枸杞子多糖提取因素进行了正交实验，优选出最佳的枸杞子多糖提取的工艺参数，同时进行了枸杞子多糖的体外抗氧化活性研究，以期为研究开发枸杞子多糖新的药物功能及保健食品提供基础数据。　　1材料与方法　　1.1仪器与试剂上海尤尼柯仪器有限公司产in离心18min，得上清液，经浓缩，再加入5

4、倍体积的乙醇，摇匀后，在4℃冰箱中放置过夜，以4000r/min离心20min。沉淀经干燥后得到粗多糖。采用硫酸－苯酚法［11］测定所提取的枸杞子多糖中多糖含量，然后根据所用枸杞子的质量（2g）计算出枸杞子中多糖得率。　　1.3.2正交实验选用L9（33）正交实验，确定提取枸杞子多糖的最佳工艺参数，水平因素见表1。　　表1正交水平（略）　　1.3.3多糖含量测定采用硫酸-苯酚法测定提取的枸杞子多糖含量［11］，葡萄糖标准曲线的相关系数为0.9988，线性方程为Y=0.007X。　　由标准曲线查出样品中多糖浓度，由下列公式计算样品枸杞子中多糖含量

5、。　　多糖含量（%）=样品浓度×稀释倍数×样品体积多糖试样质量×100%　　枸杞子多糖得率（%）=计算测得多糖的质量枸杞子样品质量（2g)×100%　　1.4体外抗氧化活性［12］　　1.4.1羟基自由基体系利用Eenton体系测定枸杞子多糖对亚铁离子催化过氧化氢产生·OH的清除能力。由于·OH可特异地使番红花红褪色，根据褪色程度用比色法测量·OH含量。每支试管分别加入0.15mol/LpH=7.4磷酸缓冲液1.5ml，260μg/ml番红花红0.2ml。1.0mmol/LEDTA-Na2-Fe2+0.7ml，再分别加入一定浓度各级多糖试样1.

6、0ml,最后加入2％H2O20.8ml，混匀后于37℃水浴保温30min。空白以蒸馏水代替试样，对照组则以蒸馏水代试样和EDTA-Na2-Fe2+于520nm测吸光度值，并以Vc作对比。　　清除率E（%）=（A样品-A空白）/（A对照-A空白）×100﹪　　1.4.2超氧阴离子体系采用邻苯三酚自氧化法，在一定条件下，邻苯三酚能够自氧化产生·O2-，加入一定量的多糖液可对·O2-产生不同的抑制作用，进而导致光吸收值的变化。取0.05mol/LpH8.2Tris-HCl缓冲液5ml于试管中，分别加入1ml一定浓度的各级多糖试样液，置于25℃水浴中预

7、热20min，再加3mmol/L邻苯三酚0.4ml，混匀，于25℃水浴中准确反应4min，立即用浓HCl0.5ml终止反应，并在320nm处测吸光度。空白对照组以相同体积Tris-HCl代替样品，每个试管做3个平行，取平均值，按下式计算清除率。　　清除率E（﹪）=（A对照-A样品）/A对照×100%　　2结果与讨论　　2.1枸杞子多糖提取　　2.1.1正交实验结果正交实验提取的枸杞子多糖得率见表2。　　表2正交实验结果（略）　　根据表2的极差分析可见，各因素对多糖得率的影响顺序为：B（温度）＞C（提取时间）＞A（固液比），说明在各因素中，水提温

8、度对多糖提取率影响最大，然后是提取时间，最后是固液比。因素A，B以第2水平，C以第3水平为最好。因此，可确定枸杞多糖的提取优化条件为A2B2C3，即最