贡菊种苗离体快繁与复壮技术的研究

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1、．．．．．＇＼正Ｖ奇＂＇＇１；、．■？．—分笑号Ｒ９３学校代号１胞７２ＵＤＣ６１０巧級学号２０１２１１报化５■＇ｆｈ广州中医药大学＼＞ｉｉＧｕａｎｚｈｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅｇｙ硕±学位论文贡菊种苗离体快繁与复壮技术的研究．．．．’．．．．．学位申请人李露华指导教师姓名巧趙美专业名称生巧学申请学位类型科学学位论文提交日期２０１５

2、年４月广州中医药大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经特别加Ｗ注明引用的内容外－本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名日期；＞《年月若０日关于学位论文使用授权的声明本人完全了解广州中医药大学有关保留使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有

3、关部口机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阀和借阅。本人授权广州中医药大学可Ｗ将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可从采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。（保密论文在解密后应遵守此规定）论文作者签名垂龍笔论义导师答日期：ｗｔＴ年月《护日贡菊种苗离体快繁与复壮技术的研究专业名称：生药学作者姓名；李露华导师姓名：潘超美摘要贡菊办ａｎｆＡｅｗａｗｏｎＷＲａｍａｔｅｌ．ＣＶｏｎｕ於献．）Ｔｚｖ．Ｇ又称黄山贡菊、徽州贡

4、（ｇｊ菊，是菊科菊属多年生草本植物；其根、茎、叶、花均可入药，具有清肝明目等功效，，目眩，咽喉肿痛可用于头风，痛肿疗毒等症。菊花作为原料药入制中成药已有多年历史，且疗效确切，市场对其需求与日俱増，如杞菊地黄丸、Ｈ宝片、清热明目茶等。贡菊在产业化生产上主要采用杆插和分株等无性繁殖方式，极易受到各种病毒等微生物侵害；在生产中随着栽培时间的推移，则病害加重，导致植株减产，种质退化，；而物理、化学等防治措施对病毒病的防治效果并不显著严重的直接导致植株死亡。目的：建立贡菊离体快繁体

5、系，对贡菊种质资源进行复壮，保证植株的遗传稳定性；为保证贡菊种质可持续利用、贡菊优质种苗的规范化（ＧＡＰ）、产业化、规模化生产奠定基础。方法；通过对引种到粤东地区的改良品种贡菊进行实地调查，分析其种质退化的原因，再采用茎尖离体培养，获得的组培苗采用热处理结合茎尖二次培养的方法脱毒，对贡菊种质进行复壮，并Ｗ胺芽増殖方式进行继代培养，建立贡菊离体快繁体系，保证植株的遗传稳定性、；试验主要采用了文献研究实地调查、单因素试验探讨、正交设计试验等方法进行。结果；在查阅了

6、大量与本研究相关的国內外参考文献资料的基础上，归纳总结了药菊种质的研究现状，内容涵盖了药菊的本草考证、生药学、化学、药理药效、临床应用、生物学、脱毒方法及脱毒鉴定、组织培养研究进展等方面的研究。通过试验研究，筛选出了初代培养、继代增殖、壮苗生根、炼苗移栽等阶段的最佳培养基及培养技术，优化和完善了贡菊组培快繁体系；建立了适用于产业化生产的贡菊脱毒技术和鉴定方法，可行性强，成本低廉，脱毒效果显著。结论：１．贡菊离体快繁体系的建立１无菌苗的获取：７０％１％酒精和０．（）氯化

7、隶为较适合的消毒溶剂，对于贡菊茎尖外植体，７０％酒精消毒４５Ｓ后再用０．１％氯化乗消毒３ｍｉｎ的时间配比对其消毒效果较理Ｉ想；对于贡菊茎节，７０％酒精消毒３０ｓ后再用０．１％氯化乗消毒１１ｍｉｎ的灭菌时间配比对其消毒效果较理想。胶芽谤导－ＢＡ２：ＷＭＳ作为基础培养基，植物生长物质Ｗ植物细胞分裂素６和生（）＋６－－长素ＮＡＡ的诱导效果较化ＭＳＢＡ１．５２．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．１ｍｇ／Ｌ培养基有利于蔽芽形成－，４５ｄ的增殖倍数为５．３５．８，且贩芽生长良好

8、。（３）各添加物对瓶苗生长的影响：在基础培养基的调整上，大量元素的用量为１５０ｍＬ／Ｌ，微量元素的用量为１ｍＵＬ，维生素的用量为１．５ｍＬ／Ｌ时能明显促进组培苗的－生长；较为适宜的琼脂浓度为４ｇ／Ｌ；挪子汁为天然添加物的首选，且在５０２００ｍＬ／Ｌ的浓度范围内，组培苗的生长随着浓度的增长而加快，表现为苗高逐渐增离、茎粗壮、叶浓绿且叶片增大：；根据正交实验结果，最利于贡菊组培苗壮苗的组合培养基为１／２ＭＳ＋薦糖３０ｇ／Ｌ＋ＡＣＩｇ／Ｌ