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1、第卷第期武汉生物工程学院学报年月,罗汉果叶片离体再生快繁技术宋鹏飞,,唐兴国’,周全‘,柯艳妮,肖晓芳,武汉生物工程学院生物工程系,湖北武汉湖北大学生物技术系,湖北武汉厦门华祥苑实业有限公司,福建厦门摘要以罗汉果叶片为外植体,探讨培养方式、激素组合对愈伤组织诱导和不定芽分化的影响。结果表明罗汉果叶片在培养基十十上培养周愈伤组织的诱导率达以上罗汉果愈伤组织在培养基,赛苯隆上不定芽的分化率可达,平均出芽指数罗汉果试管苗在培养基十上茎芽增殖比较稳定,在培养基。上培养周开始分化不定根,其生根率在以上。关键词罗汉果快繁叶片不定芽赛苯隆中图分类号文献标志码罗汉果〔本试验的目的是进一步优化实验方法、提高
2、分化效〕为葫芦科多年生宿茎攀缘藤本植物。果实率,建立高效的叶片离体再生实验体系,为罗汉果含丰富的葡萄糖、果糖和维生素,泡茶或浸酒饮用。叶片的遗传转化技术奠定基础。具有清热解毒、润肺定喘、化痰止咳、益肝健脾、提材料与方法神生津和促进肠胃消化等功效,对预防和缓解糖尿病症状,治疗冠心病和预防血管硬化等有一定功和配合使用诱导叶片脱分化效,为名贵的药食两用药材,被誉为东方神果。试验用罗汉果无菌试管苗由中科院武汉植物由于常规的繁殖方法为压蔓繁殖,繁殖效率低且种所赠送。从试管苗上摘取生长健壮、完全展开的性退化现象严重〕,国内多家科研院所都在研究利幼叶,将叶片放在净化工作台上切成。用组培快繁方法作为罗汉果
3、种苗繁育的主要手段。大小的叶块,分别接人到下列各组培养基目前罗汉果组培育苗的再生途径主要有两种一种是外植体分化产生不定芽川,这种途径常采用罗汉十果幼嫩叶片作为外植体,该方法产生不定芽频率不高,但由于产生不定芽过程中不经明显脱分化,故变异系数相对较小另一种途径是外植体经脱分化产生愈伤组织后再分化出不定芽圈,其脱分化产生。各组培养基均添加蔗糖,琼脂粉,的各种类型愈伤组织经再分化产生新芽较容易,分调。每个组合平均分装瓶,每瓶接人化频率较高,因此成为罗汉果组培快繁的主要途个叶片,叶片以正面接触培养基反置,即叶背径。而罗汉果组织培养中不定芽再生技术是实现朝上的方式培养。先暗培养周,然后转到光照上述目
4、标的关键。罗汉果叶片培养前人已有报道,度条件下培养,光照时间,收稿日期一一基金项目武汉生物工程学院科研基金资助项目作者简介宋鹏飞一,男,助理实验师,研究方向植物细胞与植物分子生物学。。。第期宋鹏飞等罗汉果叶片离体再生快繁技术温度士℃。叶片在培养室内培养周左右,不定芽的生根培养体积明显膨大呈凹凸不平状,这预示细胞在活跃地选取苗高的健康无根试管苗用于生生长和分裂。由于整个分化周期比较长,所以中间根试验,截取无菌苗顶端一高的部分留顶最好更换一次培养基。每观察一次,去掉污染芽接入到生根培养基中诱导生根,各培养基成分瓶,逐日观察动态变化,连续。培养周后每如下组选择瓶作为记录对象。愈伤组织团块的好坏以
5、大小、颜色和疏散程度表示,诱导效果以出愈率计算。由于在诱导罗汉果叶片脱分化的实验。各组培养基均添加蔗糖,琼脂粉,调。每个组合中效果较好川,故本试验重点探索不同浓度与瓶,每瓶接种无菌苗株。在光照度一组合使用的效果,而不再对不同生长素之间的下培养,光照时间,培养室温度差异作出比较。士℃,后观察统计生根状况。根系发达程出愈率一成功诱导愈伤组织的叶块数接种度以罗汉果生根植株平均根数和根的长度表示。的叶块急』数试管苗的炼苗和移栽叶片愈伤组织再分化不定芽试验待根长到左右时,将捆扎试管口的绳子将叶片诱导产生的愈伤组织在净化工作台上解开,试管转移到室温条件下,利用散射太阳光照横切成薄片,分别接人到下列各种
6、培养基射,约周时间即可移栽。移栽用的基质以珍珠岩和泥炭土体积比混合,充分吸水后用。的高锰酸钾消毒处理。移栽罗汉果苗前,用清水洗净试管苗基部的培养基,移栽后的小苗要注意保持。。各组培养基均添加蔗糖,琼脂粉适宜的湿度。。,调。每个组合平均分装瓶,每瓶接人一块愈伤组织,培养条件先期暗培养结果与分析周,后转到光照度一下培养,光照时和配合使用对叶片培养的影响间,培养室温士。每观察一不同激素水平下的培养基组合接种罗汉果叶次,去掉污染瓶。逐日观察动态变化,连续。片诱导培养的结果见表。培养周后每组选择瓶作为记录对象,芽诱导表不同培养基对罗汉果愈伤组织诱导的影响一效果以出芽率和出芽指数计算。试验中、、、生长
7、调节剂四种培养基上芽分化的效果都不太理想,后期尝试出愈率愈伤组织培养基用赛苯隆与、组合进行芽诱导试生长状态验,配制培养基白色、蓬松、易发黑,其他试验方法同上。淡绿、疏松、可分化出芽率一成功分化出芽的愈伤组织数接种淡黄、致密、难分化淡黄、疏松、可分化的愈伤组织总数淡绿、疏松、可分化出芽指数一形成不定芽的总数成功分化出芽白色、蓬松、易发黑的愈伤组织数试管苗的增殖叶片在诱导培养基上培养后萌动发育,挑选生长状态一致的试管苗在净化
