外源褪黑素对超低温冷冻小鼠成熟卵母细胞发育潜力的影响

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1、Ｖ，Ｓ８１４．８分类号学巧：Ｓ２０１２３１１９西川农化乂学硕±学位论文外源禮黑素对超低温冷冻小鼠成熟卵母细胞发育潜力的影响李伟指导教肺：用化没巧巧学科专业：动物巧传育种与《巧研巧方向：动物巧巧与脏胎工巧２０１５年６月ＳｉｃｕａｎＡｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｇｙＭａｓｔｅｒＤｒｅｅＤｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎ巧ＥｆｆｅｃｔｏｆｅｘｏｅｎｏｕｓｍｅｌａｔｏｎｉｎｏｎｄｅｖｅｌｏｍｅｎｔｏｆｃｒｏｒｅｓｅｒｖｅｄｇｐｙｐＭｉｌｏｏｃｔｅｓｉｎｍｏｕｓｅｙＬｉＷｅ

2、ｉＤｉｒｅｃｔｅｄｂｙＰ－ｒｏｆ．ＺｈｏｕＧｕａｎｇｂｉｎＡｎｉｍａｌＧｅｎｅｔｉｃｓ，ＢｒｅｅｄｉｎｇａｎｄＲｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎＡｎｉｍａｌｂｒｅｅｄｉｎａｎｄＥｍｂｒｏｅｎｉｎｅｅｒｉｎｇｙｇｇＣｈｅｎｇｄｕ，Ｓｉｃｈｕａｎ，ＣｈｉｎａＪｕｎｅ２０１５，论文完成获得：国家科技重大专项强化權黑素功能乳的转基因奶山羊新品种培育２０１４ＺＸ０８００８０２（巧资助ＴｈｉｓｗｏｒｋｗａｓｓｕｏｒｔｅｄｂｐｐｙｔｈｅＮａｔｉｏｎａｌｅｎｅｔｉｃａｌｌｍｏｄｉｆｉｅｄｏｒａｎｉｓ

3、ｍｓｂｒｅｅｄｉｎｍａｏｒｒｏｅｃｔｓｇｙｇｇｊｐｊＧｒａｎｔＮｏ．２０１４ＺＸ０８００８０２Ｂ（）论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研究工作所取得的成果。尽我所知，除了文中特别加Ｗ标注和致谢的地方外，学位论文中不包含其他个人或集体己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川农业大学或其它教育机构的学位或证书所使用过的材料一。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。＇？研究生签名：月／日关于论文使用授巧的声明本人完全了解四川农业大学有关

4、保留、使用学位论文的规定，目Ｐ：学校有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可Ｗ采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意四川农业大学可Ｗ用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。ｓｆ本论文不保密。□本论文保密，在密后适用本授＿＿年解权。＂＂（请在Ｗ上□内划Ｖ）研究生签名：＞，ａＴ年／月／Ｐ日。导师签字：年＾月也＇曰摘要本实验旨在探讨不同浓度外源魄黑素对冷冻后卵母细胞发育能力的影响。首先，小鼠Ｍｉｌ期卵母细胞采用ＯＰＳ法玻璃化冷冻保存，解冻后在含不同浓度

5、（０－９－７－－３５ｍｏｌ／Ｌ，１〇ｍｏｌ／Ｌ，１〇ｍｏｌ／Ｌ，１〇ｍｏｌ／Ｌ，１〇ｍｏｌ／Ｌ）袍黑素的Ｍ２液中培养ＩｈＲＯＳ和ＧＳＨ，然后检测卵母细胞中水平，孤雌激活后的胚胎发育能力和囊胚细－＇７３胞数；并检测了３组不同浓度（０ｍｏｌ／Ｌ，１〇ｍｏｌ／Ｌ，１０ｍｏ＾Ｌ）的视黑素处理后的卵母细胞内５种基因（化抑０口口八化／厶化公０７６，八於和化＾〇？：／）的１１１１斯乂表达水平。结果如下：（１）玻璃化冷冻解冻后的卵母细胞在含雄黑素的Ｍ２液中培养１ｈ，ＲＯＳ水平－３？＜只有１〇ｍｏｌ／Ｌ袍黑素添加组显著低

6、于未添加组（／０．０５）Ｇ細水平在所，有添加？＞０袍黑素组与未添加组之间无显著差异（ｉ．０５）。（２）Ｍ２ｈ玻璃化冷冻解冻后的卵母细胞在含縄黑素的液中培养Ｉ，经孤雌激活－，孤雌激活胚发育到２细胞胚胎的能力随着添加權黑素的浓度增加而降低，而’９‘５３？１０１０ｍｏｌ／Ｌ的權黑素添加组与未添加组无显著差异（７Ｍ）．０５），只有ｌ（Ｔｍｏｌ／Ｌ＞添加组卵裂率显著低于未添加組（ｉ＜０．０５）；孤雌激活胚发育到囊胚的能力不随添＞０加權黑素的浓度増加而改变（戶．０５）。囊胚细胞数随添加播黑素的浓度増加而降＞０低．０５）。，但差异不显著（Ｐ３－７

7、（３）实时巧光定量ＰＣＲ研究结果发现，ｌ（Ｔｍｏｌ／Ｌ和ｌ〇ｍｏｌ／Ｌ權黑素添加组－３与未添加组都能检测到好ｗＷａＷ，巧／７，化ｐａ化，诉和公的表达。１〇ｍｏｌ／Ｌ的添加组５种基因的表达量都比未添加组低，且巧／７、巧ｐＷｏｆｌｉ和公差７－７且与＞异显著ｌ（Ｔｍｏｌ／Ｌ的添加组相比，好０化？７和成如Ｃ／差异也显。ｌ〇ｍｏｌ／Ｌ；如著的添加组与未添加相比，邱ｐａ／６和巧７表达量稍低，差异不显著（Ｐ＞０．０５）；ｉＶｒ２、／／Ｗａ＊＜化抑化０７和風如：／表达量上调，但只有邱ｐａｉ差异显著（／０．０５）。（４）体外受精实验表明，冷冻会使卵母细胞

8、的卵裂率和