玉米mudr转座子介导的突变体侧翼序列分离方法研究

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1、^^Jf^IAGRICULTURALUNIVERSITYOFHEBE1硕士学位（毕业）论文玉米MuDR转座子介导的突变体侧翼序列分离方法研究学位申请人.•田玉焕指导教师：陶勇生副教授学科专业：作物遗传育种学位类别：农学硕士授予单位：河北农业大学答辩日期：二o—五年五月三十日分类号：S513单位代码：10086密级：公开学号：2012211玉米MuDR转座子介导的突变体侧翼序列分离方法研究ResearchingtheMethodsofIsolatingtheFlankingSequencesofMaizeMutants

2、InsertedbyMuDRTransposon学位申请人：田玉焕指导教师：陶勇生副教授学科专业：作物遗传育种学位类别：农学硕士授予单位：河北农业大学答辩日期：二〇一五年五月三十日独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知’除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果’也+包含为获得河北农此大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：1

3、:3i威签字円期：年‘月J！I学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解河北农北大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权河北农此大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制T-段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名:导师签名:签字H期：biy年6月円签字円期：厶工年学位论文作者毕业后去向：工作单位：电话:B-通讯地址:摘要玉米不仅是播种面积最大的粮食作物，也

4、是遗传学和植物转座子研究的模式植物。随着玉米基因组测序完成和基因组序列信息的不断完善，玉米功能基因基因组学研究已成为基因组学研究的主要方向，而缺陷突变体恰恰是这一研究的最主要的载体。Mutator（Mu）因子属于玉米内源转座子，是创制玉米缺陷突变体最有效的工具，而转座子标签技术对转座子插入侧翼序列的分离是突变体评价和利用的基础和前提。本研究以优良自交系综31（Z31）与具有MuDR活性的W22::Mu杂交构建诱变群体，获得MuDR转座子插入的玉米籽粒充实和穗萌突变体材料，将其用于MuDR-AFLP检测体系的优化和改良

5、，与此同时，基于突变体表型评价、遗传分析和插入位点靶序列的功能解析建立MuDR插入靶序列与诱变表型的关联，其主要研究结果如下：1、以W22::Mu与Z31杂交构建M2诱变群体，经遗传分析获得了6个籽粒充实突变体和1个穗萌突变体，将其用于MuDR-AFLP体系的构建；以Z31为轮回亲本与含突变位点材料杂交构建BC4F2:3代群体。对分离群体的遗传分析显示：7个突变体突变性状的遗传均是由细胞核内寡基因控制。与此同时，对籽粒充实突变体进行了籽粒籽粒容重统计分析，结果显示：相同家系凹陷籽粒与野生型籽粒容重均差异显著（p<0.

6、05）。2、以M2:3突变家系为材料，选择MuDR-TIR特异性的SacI，并且与MseI构建限制性内切酶酶切组合进行MuDR插入突变体基因组DNA酶切反应，经酶切产物连接、预扩增和选择性扩增等反应体系和反应条件的优化，构建了优化的MuDR插入侧翼序列特异性分离的AFLP体系。3、以M2:3突变家系为材料使用构建的MuDR-AFLP体系分离了6个MuDR插入侧翼序列，并且验证了MuDR插入的真实性，即是源于MuDR转座引起的插入。其中群体水平上证实了1个MuDR插入侧翼序列与籽粒充实突变表型共分离。4、基于MuDR插

7、入靶序列的生物信息学分析、突变性状的遗传分析和突变表型的鉴评，建立了突变性状与MuDR插入靶序列功能的关联。为进一步基因功能的解析创制材料。关键词：玉米；Mutator转座子；MuDR-AFLP；籽粒充实突变体;穗萌突变体AbstractMaizeisnotonlythemostplantedgraincrop,butalsothemajormodelplantspeciesforgeneticsandtransposonsresearch.Thefunctionalgenomicstudyismoreandmore

8、deeplyafterthesequencingjobandfunctionalgenomicstudyisbecomingthemajoraspectofgenomeresearch.Mutantsaregoodresoursesforgeneticreserches.Mutators（Mu）aretheendogenoustransposo