长春地区肠道病毒71型小鼠模型的致病性及对候选疫苗的保护性评价

《长春地区肠道病毒71型小鼠模型的致病性及对候选疫苗的保护性评价》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、长春地区肠道病毒71型小鼠模型的致病性及对候选疫苗的保护性评价Thepathogenesisandevaluationofvaccinecandidateinamousemodelwithenterovirus71作者姓名：常军亮专业名称：生物化学与分子生物学研究方向：分子病毒学指导教师：于晓方教授学位类别：理学博士培养单位：白求恩第一医院论文答辩日期：2015年6月5日授予学位日期：2015年6月日论文评阅人：答辩委员会组成：姓名职称工作单位姓名职称工作单位严杰教授浙江大学医学院主席刘明远教授吉林大学农学部邵

2、淑娟教授大连医科大学委员刘晓冬教授吉林大学金宁一研究员军事医学科学院岑山教授中国医学科学院周余来教授吉林大学药学院姜春来教授吉林大学郭斐研究员中国医学科学院王涛教授天津大学龚勇研究员中国科学院前言手足口病（Hand-Foot-MouthDisease，HFMD）是由多种人类肠道病毒引起的儿童常见传染病，世界大部分地区均有流行报道。肠道病毒71型(HumanEnterovirus71,EV71)和柯萨奇病毒A16型（CoxsackievirusA16，CA16）是诱发手足口病的主要病原体。手足口病多发于5岁以下的

3、婴幼儿，以发热和手、足、口腔等部位皮肤黏膜皮疹、疱疹、溃疡为主要症状，少数患者可有心肌炎、肺水肿、无菌性脑膜炎、小儿麻痹等并发症，重症可导致死亡，该病传染性强，发病率高，对儿童健康造成严重威胁。近年来，手足口病在亚太地区持续流行，发病数、严重病例和死亡病例呈逐年上升的趋势。我国于2008年将手足口病纳入丙类传染病管理。目前，手足口病尚没有特异性的抗病毒药物和治疗方法。预防性疫苗是控制手足口病的最有效的方法之一。动物模型是抗病毒药物和疫苗研发过程中重要的评价平台，建立稳定、可控的动物模型是研究病毒感染和致病机理的

4、有效途径，同时可作为抗病毒药物和疫苗研究中安全性和有效性评价的重要组成部分，对疾病的预防、抗病毒药物的开发和疫苗的研制有重要意义。EV71病毒感染动物模型报道较多，但均不能完全体现出在人类中的感染过程，可以根据研究需要，选择不同的动物模型。本研究确定了将1日龄ICR新生鼠作为感染动物，建立EV71病毒感染动物模型。在此模型基础上，系统研究了长春地区流行性EV71病毒分离株对新生鼠的感染特征，分析了病毒感染机制，证明流行株EV71病毒在新生鼠模型中具有强烈的后肢和脊柱骨骼肌损伤趋向性。应用该模型评价了我们筛选的候

5、选EV71疫苗株的有效性和广泛保护性，并作为筛选疫苗候选株的重要依据。EV71病毒属于小RNA肠道病毒，基因组易于变异和重组，基于结构蛋白核苷酸序列分型，可将EV71分为A、B、C三个基因型，其中B型和C型又可进一步各分为5个亚型。EV71的这些型和亚型在血清型上可以表现出很大的差异，这为疫苗株的筛选带来了很大的困难。在本文候选疫苗株广泛保护性研究中，我们首先用多株病毒原液制备疫苗，免疫小鼠，收集免疫血清，体外测定出免疫小鼠血清中和抗体，初步确定可以诱导广谱中和活性的疫苗候选株；I将疫苗候选株制备的灭活全病毒疫

6、苗，免疫ICR母鼠，使交配，分娩后，分别对母鼠和乳鼠血清进行EV71病毒的体外中和测定；同时，对乳鼠用多株致死性病毒攻毒，测定乳鼠体内抗体保护性，在新生鼠模型中测定了疫苗株抗血清的被动保护性；通过这三步实验评价疫苗候选株的有效性。在小鼠模型上，筛选到了具有广泛保护性的EV71病毒疫苗候选株，为制备EV71相关疫苗，控制EV71病毒引起的手足口病的爆发奠定了研究基础。进一步的，我们对在乳鼠模型中引起不同致死性及不同保护性的病毒株，进行全基因组测序，分析了这些病毒株的进化特征，以期望能够通过其进化特征找到流行和传播

7、规律，控制病毒爆发性流行；对比了结构蛋白区的基因序列和氨基酸序列，希望能找到病毒毒力和保护力决定性位点，为研究重组疫苗提供可能。总之，通过本文的研究，我们了解到长春地区流行性肠道病毒71型在乳鼠模型中的致病机理；从分离的病毒株中筛选到具有广谱保护性的疫苗候选株；清晰的了解了这些流行株病毒的遗传背景和变异位点；希望本研究为今后抗EV71病毒治疗药物和预防性疫苗的开发能提供科学依据。II中文摘要手足口病(Hand,FootandMouthDisease,HFMD)是由肠道病毒引起的全球性传染病，易发生于5岁以下儿童

8、，多数患者症状轻微，以发热和手、足、口腔等部位皮肤黏膜皮疹、疱疹、溃疡为主要症状，一般10-14天可自愈。少数病例（尤其是小于3岁者）病情进展迅速，可出现脑膜炎、肺水肿、心肌炎、弛缓性麻痹等并发症，极少数病例病情危重，可导致死亡，存活病例留有后遗症。20世纪90年代后期，手足口病开始在东亚地区流行。我国于1981年上海首次报道本病，1983年和1986年在天津2次爆发流行；1998年的