隐孢子虫病免疫学诊断方法的建立和应用及其免疫预防研究

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1、密级：论文编号：中囯农业科学院学位论文隐孢子虫病免疫学诊断方法的建立和应用及其免疫预防研究DevelopmentandApplicationofImmunologicalDiagnosisMethodsandImmunoprophylacticStudyofCryptosporidiosis硕士研宄生：刘宇轩指导教师：陈兆国研宄员申请学位类别：农学硕士专业：葡贈医学研宄方向：魂鑛生培养单位：上海兽医研宄所研究生院2015年5月独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研宄工作及取得的研宄成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外

2、，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研宄成果，也不包含为获得中国农业科学院或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研宄生签名:43吞开时间：■年6月■^曰关于论文使用授权的声明本人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定，即：中国农业科学院有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业科学院可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。研宄生签名：去1时间：W年{月2■

3、日导师签名:时间：年《月■^日中国农业科学院硕士学位论文评阅人、答辩委员会签名表论文题目隐孢子虫病免疫学诊断方法的建立和应用及其免疫预防研究动物寄生虫论文作者刘宇轩专业预防兽医学研究方向及其分子生物学指导教师陈兆国培养单位（研究所、中心）/•---■■.V姓名职称单位，1(芸'繁、二签名ji-'cj盲评//评....m盲评////人盲评////m程训佳教授复旦大学预防兽医学主%朱建国教授上海交通大学预防兽医学林矫矫研究员上海兽医研究所预防兽医学答傅志强研究员上海兽医研究所预防兽医学辩金亚美研究员上海兽医研究所预防兽医学^食(if、委.员会议记录（秘

4、书）顾惠明论文答辩时间地点2015年5月27日，上海兽医研究所。密级:论文编号:中国农业科学院学位论文隐孢子虫病免疫学诊断方法的建立和应用及其免疫预防研究DevelopmentandApplicationofImmunologicalDiagnosisMethodsandImmunoprotectiveStudyofCryptosporidiosis硕士研究生：刘宇轩指导教师：陈兆国研究员申请学位类别：农学硕士专业：预防兽医学研究方向：动物寄生虫及其分子生物学培养单位：上海兽医研究所研究生院2015年5月Secrecy:No.ChineseAcade

5、myofAgriculturalSciencesDissertationDevelopmentandApplicationofImmunologicalDiagnosisMethodsandImmunoprotectiveStudyofCryptosporidiosisM.S.Candidate：YuxuanLiuSupervisor：Prof.ZhaoguoChenMajor：PreventiveVeterinaryMedicineSpecialty:MolecularBiologyofVeterinaryParasiteMay2015摘要作为腹泻

6、病常见病原之一的隐孢子虫（Cryptosporidiumspp.）能侵入人或动物的肠道，引起隐孢子虫病（cryptosporidiosis）。在隐孢子虫的众多种类中，微小隐孢子虫（Cryptosporidiumparvum）是最常见且危害最大的。对免疫功能发育不全或缺陷的宿主，隐孢子虫会造成严重的伤害，甚至会威胁生命。目前，隐孢子虫病防控研究面临着缺乏敏感、特异、便捷的诊断技术和有效的治疗、免疫预防方法。因而，筛选免疫原性好、免疫反应性高的隐孢子虫抗原分子，研制敏感、特异的诊断技术和高保护效果的预防疫苗是当前隐孢子虫病研究的关键和重要方向。本研究以重

7、组微小隐孢子虫CP15/60（rCP15/60）和类钙调蛋白（rCML）为抗原，建立了2个隐孢子虫病间接ELISA诊断方法，并与nestedPCR方法进行了比较；利用建立的方法，对从上海地区3个屠宰场采集的猪田间血清进行了检测。结果显示，两种重组蛋白的最适包被浓度均为2μg/mL，一抗血清的最佳稀释度均为1:100，酶标二抗的最佳稀释度也均为1:800。与nestedPCR法检测结果比较，rCP15/60-ELISA的阳性和阴性符合率分别为100.0%和80.0%；rCML-ELISA的阳性和阴性符合率分别为66.7%和60.0%。利用2种方法分别对

8、291份田间样品进行检测，结果rCP15/60-ELISA法检测的阳性率为59.5%，rCML-ELISA法