鼠伤寒沙门菌l型的体外胆汁诱导及猪胆囊鼠伤寒沙门菌l型的检测研究

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1、中图分类号：R378：'.单位伐码j10660Ul)C：579学号::J0.66〇Sl2〇G26学科专业.代码：10010.3,':■密级：公开.hirnuriu

2、minpiggallbladders研究生：.孙无无导师：王和教叙年级：2012级专业:病原生物学贵阳医学院学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下，独立进行研宄工作所取得的成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写的成果作品。对本文的研宄做出重要贡献的个人和集体，D均己在文中以明确方式标明。除与外单位合作项目将予以明确方式规定外，本研宂己发表与未发表成果的知识产权均归属贵阳医学院。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名（手写）：%1^

3、\年孓月mI丄年丄月y_日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权贵阳医学院可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于（请在以下相应方框内打“V”）：1、保密□，在__年解密后适用本授权书。2、不保密s/。作者签名（手写)年4^月4日中图分类号：R378单位代码：10660UDC：579学号：10660

4、S120026学科专业代码：100103密级：公开贵阳医学院2015届硕士学位论文（科学学位）鼠伤寒沙门菌L型的体外胆汁诱导及猪胆囊鼠伤寒沙门菌L型的检测研究StudyonL-forminductionofSalmonellaTyphimuriumbybileinvitroanddeterminationoftheL-formsderivedfromSalmonellaTyphimuriuminpiggallbladders论文作者：孙亮亮指导教师：王和教授申请学位：医学硕士培养单位：基础医学院学科专业：病原生物

5、学研究方向：微生物与微生物感染研究起止日期：2013年4月至2015年3月论文评阅人：盲评答辩委员会主席：黄山主任技师论文答辩日期：2015年5月22日二〇一五年五月鼠伤寒沙门菌L型的体外胆汁诱导及猪胆囊鼠伤寒沙门菌L型的检测研究专业：病原生物学硕士研究生：孙亮亮导师：王和【摘要】目的：(1)了解胆汁对鼠伤寒沙门菌形成L型的影响，建立鼠伤寒沙门菌L型的检测方法。(2)了解猪胆囊携带鼠伤寒沙门菌L型的情况，探讨胆囊携带鼠伤寒沙门菌L型的检测方法。方法:(1)将鼠伤寒沙门菌接种于猪胆汁内，37℃需氧培养，分别于培养1

6、h~60d不同时间段取诱导物进行常规细菌学分离培养与鉴定。(2)同时取诱导物经滤菌器滤过后接种于PG液进行细菌L型的非高渗分离培养，分离细菌L型的纯培养物。观察细菌L型的形态，培养特性，革兰染色，细胞壁染色，糖发酵试验和血清学反应。(3)用检测沙门菌属特异性基因invA和鼠伤寒沙门菌特异性基因STM4495的二重PCR技术，对细菌L型进行检测，并将扩增产物进行测序分析。(4)在贵阳市某屠宰场，采集284份猪胆囊标本（胆囊组织142份和胆汁142份），采用常规细菌学方法进行鼠伤寒沙门菌的分离培养和鉴定。(5)同时采

7、用非高渗分离培养方法进行细菌L型的分离培养，并用二重PCR检测细菌L型分离株的invA和STM4495基因用于鼠伤寒沙门菌L型的鉴定。将部分PCR阳性产物片段进行测序分析。结果：(1)采用常规细菌学分离培养法从培养1h~60d的诱导物均可分离出细菌型，经鉴定为鼠伤寒沙门菌。(2)同时经非高渗分离培养检出细菌L型。细菌L型呈圆球形或卵圆形，在血培养基、麦康凯琼脂培养基和LEM平板上不能生长，革兰染色、细胞壁染色和血清学试验均呈阴性，而糖发酵试验结果无法判断。(3)二重PCR检测细菌L型invA和STM4495基因可

8、见与鼠伤寒沙门菌细菌型一致的284bp和915bp的扩增产物。将两者扩增产物序列经对比分析，发现其与GeneBank数据库中公布的鼠伤寒沙门菌的一致性分别为100%和99%。(4)采用常规细菌学方法，从284份胆囊标本中，45份胆汁和104份胆囊组织检出细菌，阳性率为52.46%（149/284）。经革兰染色和生化鉴定，检出细菌17个种属、共200株，包括革兰阴性菌184