白花丹素对树突状细胞和实验性自身免疫性脑脊髓炎的调节作用研究

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1、分类号：R392.12学校代码：10062密级：学号：2012702294硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：白花丹素对树突状细胞和实验性自身免疫性脑脊髓炎的调节作用研究TITLETheRolesofPlumbaginintheRegulationofDendriticCellsandExperimentalAutoimmuneEncephalomyelitis一级学科：基础医学二级学科：免疫学论文作者：王栋指导教师：张荣信教授天津医科大学研究生院二〇一五年五月分类号：R392.12学校代码：10062密级：学号：2012702294学位

2、类别：科学学位专业学位学科门类：医学硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：白花丹素对树突状细胞和实验性自身免疫性脑脊髓炎的调节作用研究TITLETheRolesofPlumbaginintheRegulationofDendriticCellsandExperimentalAutoimmuneEncephalomyelitis一级学科：基础医学二级学科：免疫学论文作者：王栋指导教师：张荣信教授导师组成员：薛振毅天津医科大学研究生院二〇一五年五月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果

3、。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：日期：2015年5月1日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密，在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密。（请在相对应的方框内打“√”）学

4、位论文作者签名：日期：年月日导师签名：日期：年月日中文摘要多发性硬化症（MultipleSclerosis，MS）是一种慢性自身免疫疾病，其特征为炎性脱髓鞘以及进一步的脊髓损伤。MS因其具有高发病率、病程长以及青壮年易患而备受重视，目前尚无满意的治疗方式，因此，探索新型药物对治疗或是改善MS具有重要的意义。实验性自身免疫性脑脊髓炎（ExperimentalAutoimmuneEncephalomyelitis，EAE）是MS经典的动物模型，主要用于自身免疫炎症相关的基础研究。树突状细胞（Dendritecell，DC）作为专职的抗原提呈细胞，在适应性免疫应答的初始

5、阶段起到至关重要的作用。白花丹素(PL)是一种中药复合物，具有免疫调节活性，从而其可能成为一种新的免疫相关疾病的候选药物，同时白花丹素对DC的作用以及机制尙不清楚。研究目的：体外实验探讨白花丹素对人CD14阳性单核细胞来源的DC的分化、成熟、抗原摄取和DC介导的T细胞增殖的影响，以及其对DC炎症因子表达的调节作用；体内实验进一步探究了白花丹素对EAE作用和细胞机制。实验内容和方法：体外研究用磁珠分选人外周血中CD14阳性单核细胞，随后加入细胞因子诱导其向DC分化，并用脂多糖刺激其成熟，流式细胞术检测白花丹素处理后，未成熟DC（iDC）以及成熟DC（mDC）表面标记

6、的表达情况。同时，白花丹素预处理后，用流式细胞术检测FITC-dextran的摄取来探究iDC抗原摄取能力；用混合淋巴细胞反应方法检测mDC刺激T细胞增殖的能力，并用实时定量PCR检测DC中T细胞极化以及炎症相关细胞因子的表达水平。体内研究应用注射髓鞘少突胶质细胞糖蛋白（MyelinOligodendrocyteGlycoprotein，MOG）诱导小鼠EAE模型，应用白花丹素腹腔注射治疗，对小鼠进行临床评分，处死后对其脊髓进行组化检测，包括H&E染色以及Luxolfastblue染色。应用流式细胞术检测白花丹素治疗以及未治疗的EAE小鼠脾脏中DC细胞的表达情况。

7、实验结果：体外实验中，流式细胞术结果提示白花丹素可以抑制人单核细胞来源的DC细胞的分化、成熟及其功能，包括降低iDC和mDC表面标记CD80、CD83、CD86和HLA-DR的表达，iDC抗原摄取以及mDC的抗原呈递能力；同时，白花丹素也能抑制mDC细胞中Th1，Th17细胞极化的相关细胞因子的表I达；此外，在体内实验中，白花丹素对DC细胞均具有抑制作用；进一步的，本实验研究发现白花丹素对小鼠DC细胞系DC2.4同样具有抑制作用，明显缓解小鼠EAE的发病以及临床症状。结论：白花丹素可以抑制DC细胞的分化，成熟以及功能，提示白花丹素可能具有免疫抑制和抗炎活性，因此白

8、花丹素可能