补青颗粒对高糖诱导晶状体上皮细胞的影响及对细胞自噬的机制研究

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1、分类号：R2单位代码：10752密级：公开学号：201200089宁夏医科大学硕士研究生学位论文补青颗粒对高糖诱导晶状体上皮细胞的影响及对细胞自噬的机制研究EffectofBuqingGranulesontheHumanlensepithelialcellsinducedbyhighglucoseandexpressionofautophagy-relatedgenes学位申请人：任洁指导教师：牛阳教授合作指导教师：南一副教授申请学位门类级别：医学专业名称：中医临床基础研究方向：温病卫气营血及回医理论体系的研究所在学院：中医学院论文完成日期：二○一五年四月宁夏医科大学

2、研究生学院NingxiaMedicalUniversityThesisforApplicationofMaster’sDegreeEffectofBuqingGranulesontheHumanlensepithelialcellsinducedbyhighglucoseandexpressionofautophagy-relatedgenesStudent’sName:RenJieSupervisor：Prof.NiuYangAssistantsupervisor:AssociateProfessorNanYiSubjectCategory:MedicineMajo

3、r:ClinicalbasisforTraditionalChineseMedicineSpecialty:ResearchofFebrileDiseasesWeiQi,YingandBloodtheoriesandHuiMedicinetheoriessystemSchool:NingxiaMedicalUniversityCompletionDate:Apr.2015宁夏医科大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，无抄袭及编造行为。除文中已经特别加以注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经

4、发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。论文作者签名＿＿＿＿＿论文导师签名＿＿＿＿＿年月日年月日宁夏医科大学关于学位论文使用授权的声明宁夏医科大学有权保留使用本人学位论文，同意学校按规定向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本人授权宁夏医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。可以公布（包括刊登）论文的全部或部分内容。（保密论文在解密后应遵守此规定）论文作者签名＿＿＿＿＿论文

5、导师签名＿＿＿＿＿宁夏医科大学硕士学位论文中文摘要摘要目的探讨补青颗粒对高糖诱导的人晶状体上皮细胞增殖活性、细胞周期的影响及对细胞自噬相关机制的影响，为补青颗粒用于临床治疗糖尿病性白内障（diabeticcataract，DC）提供实验依据。方法（1）采用永生化人晶状体上皮细胞（SRA01/04）进行常规培养。分别以0mmol/L、5mmol/L、10mmol/L、15mmol/L、20mmol/L、25mmol/L、30mmol/L、35mmol/L、40mmol/L、45mmol/L、50mmol/L、55mmol/L、60mmol/L、65mmol/L、75mm

6、ol/L、100mmol/L葡萄糖浓度培养24h、48h、72h，CCK-8法评价不同浓度不同时间点细胞增殖活力，筛选出最适细胞增殖浓度，流式细胞术检测细胞周期，划痕实验评价细胞迁移能力。（2）应用中药血清药理学方法制备含药血清。将大鼠随机分为空白对照组（给予-1蒸馏水10mL▪kg）、阳性对照药杞菊地黄丸（QJ）组及补青颗粒高中低浓度组（10,5,1g-1▪kg），每组各15只，每日灌胃给药2次，连续3d后取大鼠血清。选取永生系人晶状体上皮细胞（SRA01/04）进行实验，利用最适葡萄糖浓度模拟高糖环境诱导，共分6组：10%空白血清组、高糖+10%空白血清组、高糖+

7、10%QJ含药血清组、高糖+10%BQ-1含药血清组（10,5,1g▪kg）。CCK-8法检测不同血清干预高糖诱导下SRA01/04细胞24h增殖活性的影响，采用流式细胞技术（flowcytometry，FCM）检测不同血清对高糖诱导下SRA01/04细胞24h细胞周期的影响。（3）以空白对照血清、补青颗粒高浓度含药血清、补青颗粒中浓度含药血清、补青颗粒低浓度含药血清干预最适造模葡萄糖浓度诱导下SRA01/04细胞，通过定量反转录聚合酶连锁反应(quantitativereal-timepolymerasechainreaction，qRT-PCR)